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GX尺寸排阻色谱法分离检测猪圆环病毒2型病毒样颗粒

发布:东曹(上海)生物科技有限公司
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概述

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2, PCV2)是一种单链环状DNA病毒,猪感染后能引起断奶仔猪多系统衰竭综合征,是影响世界养猪业的重要病毒性疾病之一。目前,疫苗免疫是预防PCV2感染的有效手段。

在亚单位疫苗中,病毒样颗粒疫苗具有与天然病毒类似的结构而更易被免疫系统所识别,并且能够以更为真实的构象被抗原提呈细胞吞噬、加工和提呈,具有非常好的应用前景。PCV2编码的Cap蛋白是构成其衣壳的WY结构蛋白。目前,已有研究可将PCV2 Cap蛋白在大肠杆菌中进行了可溶性表达,并能够自组装为VLPs。胞内自组装VLPs可能受到宿主蛋白和DNA的污染,可能形成不稳定结构或聚集。

本篇应用是采用凝胶色谱柱TSKgel G4000SWXL对大肠杆菌表达PCV2 Cap蛋白自组装的VLPs,进行GX尺寸排阻色谱 (HPSEC) 的分离检测。

01 样品的制备

重组PCV2 Cap 蛋白的表达与纯化及自组装VLPs参考方法[1]制备。

02 分析条件

色谱柱:TSKgel G4000SWXL(7.8 mmI.D.×30 cm,8 μm)

流动相:50 mM PB+0.1 mM Na2SO4(pH 7.2)

流速:0.5 mL/min

进样体积:15 μL

柱温:室温

检测器参数:UV @280 nm

03 分析结果

猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒分离色谱图.jpg

猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒分离色谱图

04 结果与讨论

实验结果表明:使用凝胶色谱柱TSKgel G4000SWXL可对重组PCV2 Cap 蛋白自组装VLPs进行GX分离检测,VLPs的再组装效率≥99%。

参考文献:

1. 王彦伟,李鹏欤等. 猪圆环病毒2型病毒样颗粒的GX组装技术研究,ZG生物工程杂志,2020,40(11):35-42.

2021-04-27
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