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宠物饲料中的真菌毒素：14分钟快速检测，让你的毛茸伙伴吃得安心！
发布：沃特世科技（上海）有限公司(Waters)浏览次数：183真菌毒素（Mycotoxin）是由某些真菌在生长繁殖过程中产生的次生代谢产物，可对人类和动物的健康造成各种不良影响。目前已知的真菌毒素大约有300多种，其中具有代表性的包括黄曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀烯醇、展青霉素、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、伏马毒素等。这些真菌毒素首先会广泛污染农作物、粮油及其制品等，再迁移至以此为原料的动物或宠物饲料，如果饲料出现了真菌毒素的感染，宠物在食用饲料后就会出现反胃、免疫力下降甚至癌变等不良后果。
为了确保宠物饲料安全，农村农业部在2018年发布了20号公告（宠物饲料管理方法），其中LC-MS/MS标准检测方法NY/T 2071，NY/T 1970，SN/T 3136均采用了串联四极杆质谱。随着相关研究的不断推进，更多种类的真菌毒素在饲料中被发现，同时越来越多的证据表明其它真菌毒素也具有相同甚至更强的健康危害。为了尽可能降低真菌毒素的影响，相关企业和机构对于更多种类的真菌毒素检测需求大幅增加。因此，为了满足日益增长的检测需求，本研究开发出一种快速检测宠物饲料中43种真菌毒素的方法。
方法优势 前处理简单、经济、快速，适合企业及政府监管机构；
通量高，一针进样即可14分钟内同时检测43种真菌毒素；
具备良好的灵敏度、重现性以及准确度，优于现行法规需求。
样品前处理 将准备好的待检测样本进行提取。称取5.0 g样品粉末于50 mL离心管中，再加入20 mL提取液（含有1%乙酸的80%乙腈-水溶液），涡旋提取30 min。之后对其进行离心（2,000 rpm, 10 min），取上清液500 μL加500 μL纯水进行稀释并用滤膜过滤后， 进行UPLC-MS/MS分析。
LC及MS条件 LC条件 色谱系统：
ACQUITY UPLC I-Class PLUS
色谱柱：
ACQUITY Premier HSS T3 (2.1 x 100 mm, 1.8 μm, P/N:
186009468)
流动相A:
1 mM甲酸铵水溶液，含0.1%甲酸
流动相B：
甲醇，含0.1%甲酸
进样体积：
3 μL
流速：
0.40 mL/min
梯度：
MS条件 质谱系统：
Xevo TQ-S Cronos
电离模式：
ESI+/-(正负极性切换)
毛细管电压：
+2.5/-2.5 kV
锥孔气流速：
50 L/h
脱溶剂气温度：
550 ℃
离子源温度：
150 ℃
化合物MRM方法如下表：
*：表示定量离子
实验结果与讨论 下图为43种真菌毒素总离?流?谱图。
图1. 43种真菌毒素TIC图。
回收率 以实际样品中浓度加标（20 μg/kg）样品计算回收率。43种真菌毒素，除渥曼青霉素、伏马毒素及玉米赤霉醇回收率低于60%以外，其余化合物回收率均超过60%，可完全满足高通量测定需求。如表1为各化合物回收率结果。
表1. 各化合物中浓度加标回收率结果。
最低定量限、线性及重现性 各化合物最低定量限（指S/N>10）远远优于现行监管标准要求，如恩镰孢菌素A及B定量限低于0.05μg/kg，黄曲霉B1、黄曲霉G1定量限低至0.1 μg/kg，黄曲霉B2、黄曲霉G2定量限低至0.2 μg/kg。绝大部分真菌毒素定量限在2至5 μg/kg以下，除了串珠镰刀菌毒素、β-玉米赤霉烯醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉醇及α-玉米赤霉醇在10至20 μg/kg之间。
43种真菌毒素在基质中线性表现良好，线性相关系数R均大于0.995。
采用1 ppb基质匹配样品，连续进样10针，通过4种黄曲霉考察方法及仪器稳定性，结果显示4种黄曲霉连续10针，RSD<5.3%。
实验结果与讨论 本应用采用了一种简单、快速、高通量的前处理方法，实现了对宠物饲料样品中43种真菌毒素的测定。与传统标准检测方法相比，该方法通量更高、时间更快、成本更低。得益于优异的UPLC-MS/MS分离能力及灵敏度，即使在大幅稀释了样品提取液的情况下，依然能够获得相当低的定量限，满足现行检测。
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