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Lambda(λ)DNA的紫外分光光度法分析
发布:日立科学仪器(北京)有限公司浏览次数:790脱氧核糖核酸即DNA,其在特定波长范围内具有吸光性,因此实验室常使用紫外分光光度计定量分析核酸的浓度和纯度。
通常在260 nm波长下,吸光度显示为1时,表示双链DNA(dsDNA)为50 μg,单链DNA(ssDNA)为33 μg,RNA为40 μg。由此,我们可以根据260 nm下的吸光度计算DNA浓度。另外,蛋白质的吸收峰波长是280 nm。因此,可计算出DNA(260 nm处)与蛋白质(280 nm处)的吸光度比值,并将该比值除以预期值,从而判断DNA的纯度。
应用数据
测定条件
仪器:U-5100紫外可见分光光度计
测量波长范围:230~330nm
响应:低速
样品
Lambda (λ) DNA(日本基因株式会社)
TE缓冲液
附件单样品池支架
Eppendorf公司的微量样品池
测量结果
图1 Lambda (λ) DNA的标准曲线图
图2 Lambda (λ) DNA的吸收光谱
如图所示,根据吸光度测定结果绘制了Lambda (λ) DNA在2~60 ng/μL范围内的曲线图,结果显示相关系数R2=0.999,数据良好。
其中Lambda (λ) DNA浓度在30 ng/μ L时,吸光度比(A260/A280)为1.96。根据吸光度比≥1.8时表示为高纯度,因此本样品的纯度较高。
总结
紫外分光光度法定量分析DNA,操作简单,测量速度快,在核酸定量中使用频率高。日立紫外可见分光光度计U-5100采用轻巧紧凑的设计,搭配长寿命光源和双光束系统,为DNA 分析提供可靠方案。
2022-04-22 -
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