有机溶剂沉淀法分离与纯化蛋白质

有机溶剂能降低溶液的电解常数，从而增加蛋白质分子上不同电荷的引力，导致溶解度的降低；另外，有机溶剂与水的作用，能破坏蛋白质的水化膜，故蛋白质在一定浓度的有机溶剂中的溶解度差异而分离的方法，称有机溶剂分段沉淀法，它常用于蛋白质或酶的提纯使用的有机溶剂多为乙醇和丙酮 高浓度有机溶剂易引起蛋白质变性失活，操作必须在低温下进行，并在加入有机溶剂时注意搅拌均匀以避免局部浓度过大由此法析出的沉淀一般比盐析容易过滤或离心沉降，分离后的蛋白质沉淀，应立即用水或缓冲液溶解，以降低有机溶剂浓度 操作时的pH值大多数控制在待沉淀蛋白质的等电点附近，有机溶剂在中性盐存在时能增加蛋白质的溶解度，减少变性，提高分离的效果，在有机溶剂中添加中性盐的浓度为0.05mol/L左右，中性盐过多不仅耗费有机溶剂，可能导致沉淀不好 沉淀的条件一经确定，就必须严格控制，才能得到可重复的结果有机溶剂浓度通常以有机溶剂和水容积比或用百分浓度表示有机溶剂沉淀蛋白质分辨力比盐析法好，溶剂易除去；缺点是易使酶和具有活性的蛋白质变性故操作时要求条件比盐析严格对于某些敏感的酶和蛋白质，使用有机溶剂沉淀尤其要小心 津腾溶剂过滤器