创新2024 | 细节决定成败：RNA实验中RNase防控要点全解析

体液（例如汗液和皮肤油脂）中含有丰富的RNase活性，请在实验过程中戴好手套，注意勤换手套且及时丢弃旧手套（提示：若手套已接触过裸露皮肤、冰箱把手、门把手、移液器、钢笔、铅笔或实验室电话，则应视为已被RNase污染）。

吸头和离心管容易成为被忽视的潜在RNase污染源。请确保吸头取自未开封的盒子，离心管也应取自未开封或经小心处理的袋子。在操作RNA的过程中，请务必使用带认证无RNase的RNase-free隔离层（滤芯）的移液器吸头，以避免引入RNase或RNA样品间的交叉污染。

严格的RNase和DNase污染测试，并认证不含核酸酶。

请使用Invitrogen? RNaseZap?试剂或湿巾对其进行处理；如需处理大量器皿，也可对其进行烘烤，烘烤操作通常需要在450°F（232.2°C）下进行2小时或更长时间（请勿放入胶带，会导致起火）。烘烤之前，请确保用铝箔纸包裹整个金属器皿、烧杯和烧瓶的顶部，以防止烘烤后受到污染。如果不想等待两小时，则建议使用RNaseZap试剂或湿巾。将已烘烤和经RNaseZap试剂处理过的物品标记为“无RNase”并存放在明确标示为无RNase的区域中，以防止意外污染。

如果供水设备的来源及日常维护不佳，将使得分子生物学应用中使用的水和缓冲液成为RNase污染的常见来源。焦碳酸二乙酯（DEPC）处理是灭活水和缓冲液中RNase最常用的方法。然而含有伯胺基（例如Tris）和某些含仲胺或叔胺（例如HEPES）的试剂不能使用DEPC进行处理。胺基会与DEPC反应并将其“吸收”，使其无法用于灭活RNase。对于因不耐受高压灭菌而只能使用过滤除菌法的溶液，如MOPS，也就不适合用DEPC来处理，因为高压灭菌可有效灭活DEPC。我们提供各种Invitrogen?缓冲液和水（经DEPC处理或未经处理），这些缓冲液和水经过严格的质量控制测试，确保不含RNase。

RNAsecure试剂可作为一种方便易用、无致癌性的DEPC替代品，用于处理少量珍贵试剂或Tris和MOPS等无法使用DEPC进行处理的溶液，无需2小时的处理时间或高压灭菌。DEPC处理法无法灭活后处理时引入的RNase污染，而经RNAsecure试剂处理的溶液可以重新加热消除新的RNase污染物。

所有组织样品均含有内源性RNase。组织取样后若无法立即处理，常常需要用液氮迅速冷冻，尽可能地减少RNA的降解。然而，使用液氮中冷冻组织和后续处理的操作可能比较繁琐，尤其是对于大量需要保存的样品而言。Invitrogen? RNAlater?溶液是研究人员常用且信赖的组织储存和稳定液，可保护组织和细胞内的RNA。在RNA分离操作之前，您仅需将组织块简单地浸入相当于自身体积5-10倍的RNAlater溶液中，即可于4°C保存长达一个月。

注：强烈建议需要RNase处理的程序在专用空间内进行，避免RNA样品不慎接触到RNase。

查找和辨别RNase污染源常常是一项旷日持久却无果而终的工作。针对该问题较为简单但成本较高的解决方案是丢弃当前储存的所有试剂并启用全新批次的无RNase试剂（特别是当只有一种试剂可能为污染源时尤显其代价之高昂）。另一个替代方案是测试疑似污染源的溶液中是否存在RNase，使用Invitrogen? RNaseAlert?实验室检测试剂盒即可进行测试。该试剂盒为非同位素标记产品，能够使研究人员快速识别受污染的试剂和设备。

RNaseAlert实验室检测试剂盒的操作流程中使用了一种经过优化的RNA寡核苷酸，该物质经过荧光和淬灭残基的双重标记，可作为任何一种RNase污染物的靶标。在存在RNase的情况下，该底物会被裂解，释放出荧光标记。荧光信号可以通过肉眼直接观察或使用荧光计进行检测。此技术也可方便地用于检测吸头、离心管、玻璃器皿或任何其他表面中RNase污染的检测。另外，还提供RNaseAlert? QC System V2帮助监控蛋白表达中的RNase污染。

如需了解更多RNA存储、RNA降解鉴定、质粒制备中RNase污染防控、抑制酶促反应中的RNase等内容，可以点击阅读原文，下载应用指南