应用案例分享 | Dynabeads磁珠和HyTest脑钠肽抗体在化学发光免疫检测中的应用

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扫描电镜图

脑钠肽（BNP）和N端脑钠肽前体（NT-proBNP）均是心衰诊断及预后的生物标志物。心衰伴有较高的发病率和死亡率，它的普遍性及其带来的经济负担已经对临床和公共健康造成了严重影响。在全球范围内，心衰患病人数已经达到2300万人。慢性心脏疾病、高血压和糖尿病均是已知的诱发心衰的风险因素，且65岁以上人群更易发生心衰。

BNP和NT-proBNP的临床价值相似，目前均被广泛用于临床实践中（1-3）。对于疑似急性心衰患者，临床指南建议首先使用BNP或NT-proBNP用于排除心衰，也可用于疾病进程监控。这两种标志物的浓度与疾病严重程度成正比，浓度差异可达数百倍。有报道指出在心衰最早期的无症状阶段（纽约心脏病协会心功能Ⅰ级）已经可以发现这两种标志物的水平升高，这对于心衰的早期识别和观察意义重大。此外，这两种标志物的检测还可以用于不同心脏病患者的危险分层。

人BNP是一种3.5kDa的肽段，由proBNP裂解而来（图1）。BNP氨基酸序列为proBNP的77-108氨基酸序列。对BNP分子而言，氨基酸序列通常记为1-32，其理论等电点为10.95。BNP是一种具有利尿、血管舒张和肾素抑制功能的多肽类激素（4-5），属于一类具有类似环状结构的多肽激素家族，该家族还包括ANP、CNP和尿扩张素。该家族的典型结构为一个由一对半胱氨酸之间的二硫键所形成的17个氨基酸的环状结构，17个氨基酸中有11个氨基酸完全一致。人BNP的二硫键位置为C10和C26（图2）。

图1. proBNP分裂示意图。preproBNP翻译后经过信号肽的切除形成proBNP。proBNP分子上若干个糖基化位点会发生糖基化，进一步可分成T71糖基化和T71非糖基化两种proBNP分子。T71的糖基化会抑制proBNP进一步裂解。只有当proBNP的T71非糖基化，才能继续裂解为BNP和NT-proBNP。BNP、NT-proBNP及完整的proBNP均会被释放进入血液中。

图2. BNP分子不同蛋白酶作用位点解析。DDP IV为二肽基肽酶IV，NEP为脑啡肽酶，IDE为胰岛素降解酶。

BNP是一种极不稳定的分子，在进入外周循环后，它的半衰期约为20分钟。已经有若干研究显示，在心衰患者血液中存在N端或C端部分截断的多种形式BNP分子。其中全长1-32BNP仅占很小一部分。目前已知的BNP截断位点如图2所示。除此之外，BNP还有一些别的特殊生理和化学性质。

由于BNP复杂敏感的性质，使得相应的检测试剂开发成为一项颇有难度的挑战。Hytest的科学家们已经对proBNP及其相关衍生多肽进行了多年的研究，并在相关同行评审期刊中发表了多篇文章。他们提供多株性能优异的单克隆抗体，可用于灵敏度高、性能可靠的检测临床样本的BNP、NT-proBNP和proBNP的免疫检测系统的开发。

针对BNP，Hytest提供8株特异性识别BNP分子不同区域的单抗（图3）。且在Hytest内部应用实验室，基于Dynabeads MyOne Streptavidin T1磁珠，进行了化学发光免疫检测技术平台（吖啶酯和碱磷酶）原型试剂的开发，且均经过心衰患者血浆的测试验证（表1和图4）。

图3. BNP单抗位点图。

表1. BNP检测试剂配对推荐。

图4. 化学发光平台测试BNP试剂结果。化学发光平台测试BNP的校准曲线和Hytest BNP免疫检测系统与商品化试剂盒之间存在良好的相关性（样本数n=147）。

Dynabeads链霉亲和素产品的优异性能使其适用于微流控系统方案、免疫测定、蛋白质纯化、NGS、细胞分离、噬菌体展示和生物筛选等各种应用。

除此之外，Dynabeads的批间一致性，使其在工业应用领域同样受欢迎，比如免疫诊断、分子诊断、细胞和基因治疗等。

注：除上表货号外，还可提供定制产品满足客户需求。