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培养细胞不可能24小时值守,快快请出四大护法相助!

发布:默克化工技术(上海)有限公司
浏览次数:184


 

 

隔壁的直男师兄今年喜得千金,最近总在实验室诡异地傻笑,问他为何,说是时常想起女儿的可爱模样。

 

这种感情,没养育过孩子的人恐怕理解不了。但生物汪在实验室养育细胞,也一样寄托感情,生怕细胞被养坏了。一个闪失,就前功尽弃。实验结果不可靠,没有一致性和稳定性,还重复不出来,再浓密的头发也经不住这样的考验。所以,有一个稳定、一致的培养环境,那就很重要了。

 

培养细胞不可能24小时值守,快快请出四大护法相助!

 

1.     大护法:二甲基亚砜(DMSO)

 

成功冻存和复苏细胞是细胞培养研究的常规操作。细胞低温储藏时,防止冰晶形成是维持细胞活力的关键。大护法DMSO作为冷冻保护玻璃化剂,可以让细胞免受冰晶导致的机械损伤。大护法法力无边,能够用于原代、继代培养和重组的异倍体和杂交瘤细胞系、胚胎干细胞 (ESC) 以及造血干细胞的冻存。

 

下面为大家解密DMSO这个既熟悉又陌生的细胞培养大护法~~

l  DMSO的摩尔浓度是多少?

DMSO的摩尔浓度为14.1 M,依据是密度1.1 g/mL和分子量78.13 g/ml。

l  DMSO的来源?

过去,DMSO是从树皮中分离出来的。现在,它是一种商业合成的溶剂。

l  细胞冻存培养基中应使用什么浓度的DMSO?

DMSO通常以1-10%的浓度使用,具体取决于细胞系。

l  DMSO应该是液体,为什么我收到后却是固体?

DMSO的熔点为16-19℃,室温过低就凝固。这并不妨碍使用,可以缓慢加热令其重新液化,不会有任何影响。

l  哪种类型的过滤器可用于无菌过滤DMSO?

DMSO可以用带0.2 μm PTFE膜的过滤器进行无菌过滤。

 

每个伺候细胞的“宝爸宝妈”对棕瓶子白盖子的DMSO应该都不陌生。没错!正是Sigma-Aldrich?品牌热卖的这款DMSO(货号:D2650):明星产品,质量过硬,口碑积累,适用性广,久经验证。

 

2.     二护法:血清

 

血清里的生长因子能促进细胞的繁殖,附着因子可促进细胞的贴壁,此外矿物质、脂类及激素对细胞也大有裨益。常用的血清有胎牛血清和小牛血清,公认澳洲来源的血清品质更优、更安全。

 

赶快来了解一下保护细胞的二护法吧~~

l  如何解冻血清?

血清应在2-8°C过夜解冻以避免降解,或者在室温条件下,定期轻轻摇动使组分重悬。解冻的血清在加入细胞培养基前应该混合均匀。反复冻存会严重影响血清品质,建议将解冻的血清分装成单次使用量,并冻存于-20°C。如果储存于2-8°C的环境中,应该在2-4周内尽快使用。温度超过37°C时血清会降解,功能遭到破坏。

l  如果血清收到时存在部分解冻,还能继续使用吗?

血清是干冰包装运输,到达时应该是冷冻状态。运输超期,会部分解冻,但依然可以继续使用。

l  培养基中加入血清和所有补充物后可以储存多久?

如果正确无菌操作,添加血清的培养基可以在2-8°C最长储存6周。不论储存时间长短,一旦培养基变浑浊,应该使用适当的方法丢弃。

l  为什么血清会出现浑浊或絮状物质?

原因很多,主要有二:

1.  反复的冻融会使血清脂蛋白发生变性造成浑浊,所以,一定要分装哦~~

2.  血清加工中遗留的纤维蛋白原在解冻时会转化成纤维蛋白,过量的纤维蛋白就呈现为絮状物。不要着急,可以离心移除;不推荐过滤哦,因为容易堵。

l  什么是γ辐照的血清?

γ辐照的血清通过暴露于放射性60Co产生的25-40 kGy剂量的γ射线来灭活病毒和其他外来微生物(比如支原体)。γ辐照处理不影响血清的理化性质或细胞培养性能。

l  为什么有些血清是热灭活的?如何热灭活?

哺乳动物血清中天然存在的补体蛋白参与细胞溶解事件、收缩平滑肌、从肥大细胞和血小板中释放组胺和激活淋巴细胞和髓细胞。热灭活破坏了血清中补体的活性,因此免疫学应用,培养胚胎干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时推荐使用。

热灭活方法是在56°C水浴中处理30分钟,并每隔大约10分钟旋转一次瓶子。为了保持精确,可使用一个类似大小的瓶子作为对照,对照瓶内放入同等体积的水,并放置一个温度计,在温度到达56°C时开始计时30分钟。热灭活过程必须小心控制,避免血清中支持细胞和组织繁殖的关键蛋白组分发生降解。

l  胎牛血清的颜色和之前使用的批次不同,会影响血清使用效果吗?

血清的颜色取决于血红蛋白浓度,颜色差异不影响血清性能。

 

说了这么多,从哪里请到这尊神呢?当然选默克啦~~澳洲来源的牛血清,满足培养细胞的不同需要!

货号

产品描述

F8318-500ML

胎牛血清,澳大利亚来源,无菌,适合细胞培养,适合杂交瘤细胞,500mL

F8687-500ML

胎牛血清,澳大利亚来源,γ辐照,无菌,适合细胞培养,适合杂交瘤细胞,500mL

B7446-1000ML

小牛血清,澳大利亚来源,无菌,适合细胞培养,适合杂交瘤细胞,1000mL

B7447-1000ML

小牛血清,澳大利亚来源,γ辐照,无菌,适合细胞培养,适合杂交瘤细胞,1000mL

 

3.     三护法:胰蛋白酶

 

在细胞培养中,从组织上解离或从贴壁基质上分离细胞的步骤很关键,一般使用胰蛋白酶。胰蛋白酶作用于赖氨酸或精氨酸的C末端,在37°C时具有最(佳的效率,因此使用期前要预热。当然,高浓度的胰蛋白酶长期孵育会去除细胞表面蛋白而损伤细胞,甚至杀死细胞。看来,这个护法的脾气可不好哦~~

 

根据应用和细胞类型的不同,胰蛋白酶的组分和浓度也不同。比如,粘附分子在钙离子存在时决定细胞-细胞和细胞-基质的相互作用,为了削弱折衷联系,通常使用含EDTA的胰蛋白酶螯合二价阳离子(Ca, Mg)。

 

胰蛋白酶的主要来源是猪的胰脏,产品是冻干粉或溶液。为了避免动物或微生物物质,现在也有技术可以在玉米中重组表达牛胰蛋白酶,厉害吧?(点击这里,了解更多:T3449)。

 

胰蛋白酶的使用浓度也很有讲究。对于强贴壁细胞系,常使用0.25%-2.5%的胰蛋白酶。如果实验需要细胞表面蛋白完整,则应降低使用浓度(0.05%胰蛋白酶)。

 

4.     四护法:抗生素

 

细菌的生存环境这么好,肯定有坏蛋觊觎,这就需要请出四护法——抗生素。

 

常见的生物污染由细菌、真菌和支原体造成,部分由病毒、化学物和细胞交叉污染造成。抗生素可以控制细胞培养中的生物污染。灵活使用抗生素是控制污染的方法,但千万不要偷懒,还是要注意无菌操作哦~~

 

青霉素对大多数革兰氏阳性菌和少数革兰氏阴性菌有效,链霉素对革兰氏阴性菌和少数革兰氏阳性菌有效,联合使用青霉素和链霉素(简称双抗),就能有效控制细胞培养中大多数细菌的污染啦~~

 

默克旗下有相当靠谱的抗生素。Sigma-Aldrich?品牌热卖的青链霉素溶液(货号为V900929)不仅性能稳定,超高性价比;而且还是即用型经典配方(10KU青霉素和10mg链霉素/mL),直接以1:100比例添加到培养基中就全搞定!

 

怎么样?这四大护法,是不是各个身手不凡呀!有了他们,细胞就可以健康无忧啦~~





2021-01-11
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