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并联色谱技术在生化蛋白样品及单克隆 抗体分析中的应用
发布:赛默飞色谱与质谱中国浏览次数:711生物制药是生物技术产业中发展最为迅速的部分,以单克隆抗体药物为 标志,目前全qiu已批准35个抗体药物上市,用于癌症、自身免疫、黄斑变 性、血液病和感染治liao等[1]。在生物制药的每个生产环节,产品的纯化和分 析过程都至关重要。早期抗体的质量控制过程中,必须测定样品的效价、聚 集体和电荷亚型。单克隆药物(MAb)产品中两个主要的杂质是电荷亚型单 抗和单抗聚集体,这些副产物会产生与主产品不同的药效,有时会引起严重 的副作用,如抗药性抗体的形成。蛋白聚体是在生产过程、纯化或者运输过 程中产生(如温度,pH的影响)。本文讨论了采用一套HPLC系统(UltiMate 3000钛系统)同时实现单克隆抗体的聚集体的分离和电荷亚型的分离。 测试条件 仪器:UltiMate 3000钛系统,包括带有在线脱气 单元的双三元梯度泵;带有生物兼容的十通阀;WPS3000T(B)FC分析型,带样品收集功能的自动进样器; 紫外检测器(UV);二极管阵列检测器(DAD)。系统 连接见图1。 离子交换色谱(IEC右泵) Thermo Scientific MAbPac SCX -10(4 mm i.d. ×250 mm )色谱柱阳离子交换模式分离单克隆抗体的电 荷亚型色谱条件: 流动相A:20 mM MES缓冲盐,60 Mm NaCl ,pH5.6 流动相B:20 mM MES缓冲盐,300 Mm NaCl , pH5.5 梯度分离条件:30 min内15-45%B;6 min 100%B清 洗;10 min 15%B平衡 流速:1.0 mL/min 检测波长:280 nm 温度:30 ℃ 体积排阻色谱(SEC左泵)
2021-06-17相关仪器 -
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