人白细胞介素-6（IL-6）酶联免疫检测

人白细胞介素-6（IL-6）酶联免疫检测试剂盒使用说明书使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测人白细胞介素-6（IL-6），只能用于研究用途，不得用于医学诊断。用途：用于人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素-6（IL-6）测定。工作原理本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人白细胞介素-6（IL-6）水平。向预先包被了人白细胞介素-6（IL-6）单克隆抗体的酶标孔中加入人白细胞介素-6（IL-6），温育；温育后，加入生物素标记的抗IL-6抗体。再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅与样品中人白细胞介素-6（IL-6）的浓度呈正相关。试剂盒组成试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品32ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存链霉亲和素-HRP3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存生物素标记的抗IL-6抗体0.5ml×1瓶1ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存需要而未提供的试剂和器材1．37℃恒温箱。2．标准规格酶标仪。3．精密移液器及一次性吸头4．蒸馏水，5．一次性试管6．吸水纸注意事项1．从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差3．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.4．为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。5．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。6．底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。洗板方法手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中标本要求1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。操作程序1.标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。）16ng/L5号标准品120μl的原倍标准品加入120μl标准品稀释液8ng/L4号标准品120μl的5号标准品加入120μl标准品稀释液4ng/L3号标准品120μl的4号标准品加入120μl标准品稀释液2ng/L2号标准品120μl的3号标准品加入120μl标准品稀释液1ng/L1号标准品120μl的2号标准品加入120μl标准品稀释液2.根据代测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。3.加样：1）空白孔，空白对照孔不加样品，生物素标记的抗IL-6抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂A&B和终止液，其余各步操作相同；2）标准品孔：加入标准品50ul，链霉亲和素-HRP50ul（标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加）；3）代测样品孔：加入样本40ul，然后各加入抗IL-6抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul，盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37℃温育60分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.显色：每孔先加入显色剂A50ul，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.7.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。8.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后10分钟以内进行。9.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。操作程序总结：准备试剂，样品和标准品加入准备好的样品和标准品，生物素标记的二抗和酶标试剂，37℃反应60分钟洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟加入终止液15分钟内读OD值计算检测范围：0.5ng/L→16ng/L。保存：2-8℃。有效期：6个月（2-8℃）。HumanInterleukin-6（IL-6）ELISAKitInstructionThiskitisonlyforscientificresearch,andshallnotbeusedasaclinicaldiagnosisofuse.PurposeThiskitallowsforthedeterminationofIL-6concentrationsinHumanserum,cellculturesupernatant,andotherbiologicalfluids.PrincipleThekitassayHumanIL-6levelinthesample，addHumanIL-6antibodytomicrotiterplatewells,afterIncubating,addBiotinylatedantiIL-6-antibody,thenCombinedStreptavidin-HRP,becomecomplex,afterIncubatingandwashingCompletely,AddTMBsubstratesolution,TMBsubstratebecomesbluecolor,reactionisterminatedbytheadditionofasulphuricacidsolutionandthecolorchangeismeasuredspectrophotometricallyatawavelengthof450nm.TheconcentrationofIL-6inthesamplesisthendeterminedbycomparingtheO.D.ofthesamplestothestandardcurve.MaterialsprovidedwiththekitMaterialsprovidedwiththekit48determinations96determinationsStorageUsermanual11Closureplatemembrane22Sealedbags11Microelisastripplate112-8℃Standard：32ng/L0.5ml×1bottle0.5ml×1bottle2-8℃Standarddiluent3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Streptavidin-HRP3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃BiotinylatedantiIL-6-antibody0.5ml×1bottle1ml×1bottle2-8℃ChromogenSolutionA3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃ChromogenSolutionB3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃StopSolution3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃washsolution（20ml×20fold）×1bottle（20ml×30fold）×1bottle2-8℃Materialsrequiredbutnotsupplied1.37℃incubator2.Standardmicroplatereader（450nm）3.PrecisionpipettesandDisposablepipettetips.4.deionizedwater.5.DisposableTesttube6AbsorbentpaperImportantnotes1.Thekittakesoutfromtherefrigerationenvironment首ldbebalanced15-30minutesintheroomtemperature,ELISAplatescoatedifhasnotuseupafteropened,theplate首ldbestoredinSealedbag.2.addSamplewithsamplerEachstep,Andproofreaditsaccuracyfrequently,avoidstheexperimentalerror.3.Pleaseaccordingtouseinstructionstrictly,Thetestresultdeterminationmusttakethemicrotiterplatereaderasastandard.4.UsenewdisposalplasticpipettetipsandClosureplatemembraneforeachstandard,inordertoavoidcrosscontamination.5.Donotmixreagentswiththosefromotherlots.6.Thesubstrateevadethelightpreservation.Specimenrequirements1.extractassoonaspossibleafterSpecimencollection,andaccordingtotherelevantliterature,and首ldbeexperimentassoonaspossibleaftertheextraction.Ifitcan’t,specimencanbekeptin-20℃topreserve,Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.2.Can’tdetectthesamplewhichcontainNaN3,becauseNaN3inhibitsHRPactive.Assayprocedure1.Diluteandaddsample:DiluteOriginaldensityStandardasfollowtable:16ng/L5Standard120μlOriginaldensityStandard+120μlStandarddiluent8ng/L4Standard120μl5Standard+120μlStandarddiluent4ng/L3Standard120μl4Standard+120μlStandarddiluent2ng/L2Standard120μl3Standard+120μlStandarddiluent1ng/L1Standard120μl2Standard+120μlStandarddiluent2.accordingtestingSamplenumberstodefinehowmanywellsnedd,StandardandblanksuggestedDoholes.3.addsample：1）blankwells:（blankcomparisonwellsdon’taddsample,BiotinylatedantiIL-6-antibodyandStreptavidin-HRP,othereachstepoperationissame）;2）Standardwells:addStandard50μlandStreptavidin-HRP50μl;3）testingSamplewells:addsample40μl,thenaddantiIL-6-antibody10μl,Streptavidin-HRP50μl.closingplatewithClosureplatemembrane,incubatefor60minat37℃.4.Configurateliquid:30-fold（or20-fold）washsolutiondiluted30-fold（or20-fold）withdistilledwaterandreserve.5.washing：UncoverClosureplatemembrane,discardLiquid,drybyswing,addwashingbuffertoeverywell,stillfor30sthendrain,repeat5times,drybypat.6.color：AddChromogenSolutionA50ulandChromogenSolutionBtoeachwell,evadethelightpreservationfor10minat37℃7.Stopthereaction：AddStopSolution50μltoeachwell,Stopthereaction（thebluecolorchangetoyellowcolor）.8.assay：takeblankwellaszero,Readabsorbanceat450nmafterAddingStopSolutionandwithin10min.9.CalculateofresultStepsdescriptionStandard,SamplediluentAddStandard,Samplediluent,BiotinylatedandHRP,incubatefor60minat37℃.Wash5times,AddChromogenSolutionAandB,incubatefor15minat37℃.AddStoppSolutionReadabsorbanceat450nmwithin15mincalculateAssayrange0.5ng/L→16ng/LStorageandvalidity1．Storage：2-8℃.2．validity：sixmonths.