【行业领先】迪马科技助力GB 5009.298-2023三氯蔗糖的测定

本方案适用于红酒、棒棒糖、蜜饯、绿豆糕、酱油、醋和甜面酱中三氯蔗糖的检测，红酒方法定量限20mg/kg，棒棒糖、蜜饯、绿豆糕、酱油、醋和甜面酱方法定量限30mg/kg。

2.1 液态酒类试样（红酒）

2g样品，旋蒸至干，用1mL水溶解，经0.45μm亲水PTFE滤膜过滤后，待测。

2.2 糖果、蜜饯试样（棒棒糖、半边梅）

2g样品，加入5mL水，振荡3min，加入15mL甲醇，0.5mL乙酸锌和0.5mL亚铁氰化钾溶液，继续振荡30s，经60℃水浴加热15min，超声提取20min，3000rpm离心10min，将上清液移入50mL离心管中，沉淀物加入5.0mL甲醇水（75+25），振荡30s，3000rpm离心10min，重复提取2次，合并上清液。将全部上清液转移至分液漏斗中，加入30mL正己烷，振摇2min，静置分层20min，取下层液体在50℃下减压蒸至1mL左右，用9mL水分3次冲洗旋蒸瓶，冲洗液合并至15mL离心管中，超声处理5min，3000rpm离心10min，待净化。

2.3 醋、酱油、酱及酱制品类试样（酱油、醋、甜面酱）

2g样品，加入1.0g中性氧化铝，加入5mL水，振荡3min，加入15mL甲醇，继续振荡30s，超声提取20min，3000rpm离心10min，将上清液移入50mL离心管中，沉淀物加入5.0mL甲醇水（75+25），振荡30s，3000rpm离心10min，重复提取2次，合并上清液。将全部上清液转移至分液漏斗中，加入30mL正己烷，振摇2min，静置分层20min，取下层液体在50℃下减压蒸至1mL左右，用9mL水分3次冲洗旋蒸瓶，冲洗液合并至15mL离心管中，超声处理5min，3000rpm离心10min，待净化。

2.4 其他试样（绿豆糕）

2g样品，加入5mL水，振荡3min，加入15mL甲醇，0.5mL乙酸锌和0.5mL亚铁氰化钾溶液，继续振荡30s，超声提取20min，3000rpm离心10min，将上清液移入50mL离心管中，沉淀物加入5.0mL甲醇水（75+25），振荡30s，3000rpm离心10min，重复提取2次，合并上清液。将全部上清液转移至分液漏斗中，加入30mL正己烷，振摇2min，静置分层20min，取下层液体在50℃下减压蒸至1mL左右，用9mL水分3次冲洗旋蒸瓶，冲洗液合并至15mL离心管中，超声处理5min，3000rpm离心10min，待净化。

ProElut PLS 200mg/6mL（Cat.#:68012）

(1)活化：依次向柱中加入4mL甲醇、4mL水，弃去流出液；

(2)上样：将待净化液加入柱中，弃去流出液（控制流速不超过每秒1滴）；

(3)淋洗：柱上液面为2mm左右时加入1mL水；

(4)洗脱：3mL甲醇洗脱;

(5)定容：将洗脱液在50℃下减压蒸干，用乙腈水（11+89）定容至1mL，疏水PTFE滤膜过滤，供HPLC分析。

色谱柱：Bio-Bond C18 250×4.6mm，5μm（Cat.#:84006）

流速：1.0mL/min

进样量：20μL

柱温：35℃

检测器：ELSD

温度：40℃

压力：4.0bar

Gain：4

流动相：A：水；B：乙腈，A:B=89:11。

当检测样品基质复杂，强保留物质影响后续检测时，可采取梯度洗脱程序，梯度设置如下：

更多样品色谱图详见下方：“阅读原文”。

本方案适用于酱油、醋、甜面酱中三氯蔗糖的检测，方法定量限30mg/kg。(针对国标方法重现GB 5009.298-2023第一法5.2.2 醋、酱油、酱及酱制品类试样在目标峰出峰位置附近杂质干扰、基线不平，低浓度不便于定量的问题，对前处理方法进行了优化和简化。）

2g样品，加入8mL 水和2mL 200g/L乙酸铅溶液，振荡2min，超声提取5min，6000rpm离心5min，取10mL上清液，待净化。

ProElut PLS 200mg/6mL（Cat.#:68012）

(1)活化：依次向柱中加入5mL甲醇、5mL水，弃去流出液；

(2)上样：将待净化液加入柱中，弃去流出液（控制流速不超过每秒1滴）；

(3)淋洗：向柱中加入5mL 20%甲醇水溶液，弃去流出液；

(4)洗脱：向柱中加入3mL甲醇，收集流出液；

(5)定容：将洗脱液在50℃下减压蒸干，用流动相定容至1mL，疏水PTFE滤膜过滤，供HPLC分析。

色谱柱：Bio-Bond C18 250×4.6mm，5μm（Cat.#:84006）

流速：1.0mL/min

进样量：20μL

柱温：35℃

检测器：ELSD

温度：40℃

压力：4.0bar

Gain：4

流动相：A:水；B:乙腈，A:B=89:11。

当检测样品基质复杂，强保留物质影响后续检测时，可采取梯度洗脱程序，梯度设置如下：

更多样品色谱图详见下方：“阅读原文”。

本方案适用于酱油中三氯蔗糖的检测，方法定量限30mg/kg。(针对已优化方法中酱油的高水平加标回收率低的问题，对前处理过程再次进行优化，并把添加水平提高到2000mg/kg。）

分别称取0.25g、0.5g、1g、2g样品，加入8mL 水和2mL 200g/L乙酸铅溶液，振荡2min，超声提取5min，6000rpm离心5min，取10mL上清液，待净化。

ProElut PLS 200mg/6mL（Cat.#:68012）

ProElut PLS 500mg/6mL（Cat.#:68005）

(1)活化：依次向柱中加入5mL甲醇、5mL水，弃去流出液；

(2)上样：将待净化液加入柱中，弃去流出液（控制流速不超过每秒1滴）；

(3)淋洗：向柱中加入5mL 20%甲醇水溶液，弃去流出液；

(4)洗脱：向柱中加入3mL甲醇，收集流出液；

(5)定容：将洗脱液在50℃下减压蒸干，用流动相定容至1mL，疏水PTFE滤膜过滤，供HPLC分析。

色谱柱：Bio-Bond C18 250×4.6mm，5μm（Cat.#:84006）

流速：1.0mL/min

进样量：20μL

柱温：35℃

检测器：ELSD

温度：40℃

压力：4.0bar

Gain：4

流动相：A：水；B：乙腈，A:B=89:11。

当检测样品基质复杂，强保留物质影响后续检测时，可采取梯度洗脱程序，梯度设置如下：

1. 食品安全国家标准GB5009.298-2023第一法重现的结果中，前处理方法5.2.2 醋、酱油、酱及酱制品类试样在目标峰位置出现基线不平不便于定量的问题，使用优化方法后，酱油和甜面酱样品在三氯蔗糖目标峰附近基线更平，无杂质干扰，便于定量，并简化了流程提高了实验效率。

2. 加标水平为2000mg/kg 酱油样品中，PLS小柱填料质量由200mg 提高到500mg后，优化后方法的回收率由71.5%提高到82.2%；样品称样量由2g降低到0.25g，优化后方法的回收率由71.5%提高到107.7%，由此可见，增加填料质量或者降低称样量可以提高回收率，客户可根据对回收率的要求，进行选择。

3. 蒸发光散射检测器作为质量型检测器，响应值与溶质颗粒大小和数量有关，根据标准要求，以标准系列工作液质量浓度为横坐标，以峰面积响应值为纵坐标，绘制对数回归曲线，并测试线性范围。本次实验标准曲线取20、50、200、500、1000μg/mL，相关系数R= 0.9979365；当加入5000μg/mL时，R= 0.9940418，客户可根据自身对曲线相关系数的要求选择是否加入浓度为1000μg/mL以上浓度的标准品。

本方案适用白酒、红酒、糖果、酱油、醋、甜面酱、饼干中三氯蔗糖的检测。

(1) 三氯蔗糖储备液：称取蔗糖标准品0.25g，用水溶解并定容至25mL，配置成浓度为10.0mg/mL的储备液。

(2) 三氯蔗糖标准工作液：准确吸取适量三氯蔗糖储备液，用水稀释并定容，配置成浓度为100μg/mL的工作液。

ProElut PLS 200mg/6mL（Cat.#:68012）

(1)活化：用4mL甲醇、4mL水活化；

(2)上样：准确移取10mL试样提取液过柱，控制流速不超过1滴/s，弃去流出液，推干小柱；

(3)洗脱：加入3mL甲醇洗脱，并收集洗脱液到10mL容量瓶中，加水定容，混匀，过Nylon膜（Cat.#:37177），上机分析。

色谱柱：Leapsil^? C18 100x4.6mm, 2.7μm （Cat.#:86002)

流速：0.6mL/min   

进样量：1μL

柱温：40℃

流动相：A: 水  B:甲醇

梯度设置：

(2) 质谱条件

电离模式：ESI

扫描方式：负离子扫描

检测方式：多反应监测

电喷雾电压：-4500V

雾化气压力：50psi

辅助气压力：50psi

气帘气压力：20psi

离子源温度：500℃

更多样品色谱图详见下方：“阅读原文”。