【GB 31657.2-2021】蜂蜜中喹诺酮类药物多残留的检测

蜂蜜中喹诺酮类药物多残留的检测 

SPE-UPLC-MS/MS法

喹诺酮类药物是人工合成的抗菌药物，因其价格低廉、抗菌作用强被广泛用于治疗畜禽动物的细菌感染疾病。但人体食用含有该类药物的畜禽产品后，会引起人体分泌系统紊乱、神经系统受损，对人体产生一定的危害。因此，国家规定了畜禽产品中喹诺酮类化合物的最高残留限量。

参考《GB 31657.2-2021 食品安全国家标准 蜂产品中喹诺酮类药物多残留的测定 液相色谱-串联质谱法》，建立了SPE-UPLC-MS/MS法，可测定蜂蜜中喹诺酮类药物多残留。本方案使用磷酸盐缓冲液提取，ProElut^? PLS净化，Endeavorsil C18色谱柱分离检测，定量限与标准方法一致，回收率在80%-110%之间。

本方案与GB 31657.2-2021相比，增加30%甲醇水淋洗，这样可以更好的除去杂质，提高回收率，同时，洗脱液由之前的甲酸甲醇、乙酸乙酯洗脱，更换为氨水甲醇洗脱，以此减少氮吹对目标物的影响，进而提高回收率和灵敏度。

本方案适用蜂蜜中喹诺酮类药物多残留的检测。

(1) 喹诺酮类混标储备液：由标准品部提供，浓度100μg/mL，溶于甲醇。(Cat.#: 47944)

(2) 喹诺酮类混标中间液Ⅰ：准确吸取适量喹诺酮类混标储备液，用甲醇稀释并定容，配置成浓度为1μg/mL的混标中间液Ⅰ。

(3) 喹诺酮类混标中间液Ⅱ：准确吸取适量喹诺酮类混标中间液Ⅰ，用甲醇稀释并定容，配置成浓度为0.1μg/mL的混标中间液Ⅱ。

取试样2g，于50mL离心管中，加磷酸盐缓冲液^*20mL，涡旋1min，振荡10min, 10000r/min离心5min，取上清，备用。

*磷酸盐缓冲液：取十二水磷酸氢二钠7.16g，二水磷酸二氢钠3.12g，加水800mL使溶解，用磷酸调pH至3.0，用水稀释至1000mL。

ProElut PLS 200mg/6mL (Cat.#: 68012)

(1)活化：用5mL甲醇和5mL水活化；

(2)上样：备用液全部过柱，弃去流出液；

(3)淋洗：依次用5mL水，5mL 30%甲醇水淋洗，真空抽干5min，弃去流出液;

(4)洗脱：加入5mL 5%氨水甲醇洗脱，并收集洗脱液；

(5)重新溶解：将洗脱液在40℃水浴下氮吹近干(剩余大约0.1mL)，用5%乙腈甲酸水^*定容到1mL, 混匀，过Nylon膜(Cat.#: 37177)，上机分析。 

^*5%乙腈甲酸水: 取乙腈5mL，加入0.1%甲酸溶液95mL，混匀。

取经提取和净化空白试料，加入适量标准混合溶液，用5%乙腈甲酸水定容1mL，过Nylon膜(Cat.#: 37177)，上机分析。

(1) UPLC条件

色谱柱：Endeavorsil^? C18 50x2.1mm, 1.8μm (Cat.#:87002)

流速：0.3mL/min

进样量：10μL

柱温：35℃

流动相：A: 0.1%甲酸水  B:甲醇

(2) 质谱条件

电离模式：ESI

扫描方式：正离子扫描

检测方式：多反应监测

电喷雾电压：5500V

雾化气压力：50psi

辅助气压力：50psi

气帘气压力：20psi

离子源温度：500℃