热点应用丨基于HILIC模式的SCION（赛里安）LC6000高效液相色谱仪对功能糖的测定

前言

全 球对于乳制品中功能糖的数量和质量的控制需求越来越高。乳果糖是一种在乳制品中发现的功能糖，当以少量摄入时，能够调节肠道健康。乳果糖、乳糖和半乳糖的化学结构非常相似，导致色谱分离困难。

本文开发了一种使用亲水作用液相色谱（HILIC）检测并完全分离乳果糖、乳糖和半乳糖的方法。HILIC是一种利用极性固定相和流动相（包含水和更少极性的溶剂，如乙腈）的一定比例的色谱技术。

实验部分

01 仪器 

采用包含以下模块的SCION（赛里安）LC6000高效液相色谱仪系统：

▪ 集成六通道真空脱气的SCION LC6100四元泵

▪ SCION LC6210 高精度、低残留自动进样器

▪ SCION LC6320 立式柱温箱

▪ SCION LC6460 RI示差检测器

02 液相色谱条件 

表1. 方法参数

试剂及标准品

制备了包含每个目标分析物（乳果糖、乳糖和半乳糖）的校准标准品，浓度范围从0.01%到0.05%。

结果

01 示例图谱 

当分析功能糖时，最关键的是完全分离每个目标化合物。图1展示了使用HILICpak VG-50柱的分离度。

图1.乳糖、乳果糖和半乳糖示例色谱图

中国药典（2020年版）描述了在使用RI检测器和HILIC模式色谱分析功能糖时必须满足的分离规范。中国药典（2020年版）规定：“乳果糖和乳糖之间的分离度大于2.0”。

使用HILICpak VG-50色谱柱与SCION LC6000-RI检测器相结合，所得到的分析分离度超过了药典要求，且在15min内完成分离，突显了在HILIC模式下使用LC6000液相色谱仪时进行色谱分离的卓 越性能。下表是中国药典（2020年版）规定的乳果糖到乳糖的分离度要求， LC6000完全满足要求：

表2. 乳果糖和乳糖之间的分离度

02 标准曲线 

所有目标化合物在0.01%至0.05％浓度范围内的校准曲线。所有目标化合物表现出良好的线性，相关系数R2≥0.9991.详见图2、图3、图4。

图2. 乳果糖标准曲线

图3.半乳糖标准曲线

图4. 乳糖标准曲线

结论

本应用使用SCION（赛里安）LC6000配置LC6460 RI检测器，在HILIC模式下实现乳果糖、半乳糖和乳糖优异的分离度和线性，并且在十五分钟内完成分析，该方法是应对复杂糖分析的理想解决方案。