单克隆抗体第-一次筛选的方法详解

单克隆抗体第-一次筛选是制备过程中的关键步骤，涉及抗原特异性、抗体分泌量和细胞生长特性等多方面评估。通过精细操作和科学流程，确保筛选出特性优良的杂交瘤细胞株，为后续研究与应用奠定坚实基础。下面一起来看下单克隆抗体第-一次筛选的方法：

第-一次筛选

首先，在已免疫过的B淋巴细胞（即效应B细胞）和骨-髓瘤细胞进行杂交时，可能出现的情况应该先弄清楚。

如果只考虑两两融合，可能的情况有：（效应）B淋巴细胞和（效应）B淋巴细胞的融合；（效应）B淋巴细胞和骨-髓瘤细胞的融合（即杂交瘤细胞）；骨-髓瘤细胞和骨-髓瘤细胞的融合（即瘤瘤细胞）。

第-一类细胞在体外培养的条件下，因为无法无限增殖，最-终死亡，因此，筛选的关键是限制第二类细胞的增殖。科学家在设计实验时，已经考虑到这方面问题，所以他们选择的瘤细胞是有遗传缺陷的，即胸腺嘧啶核苷激酶缺陷（TK－）或者次黄嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT－）缺陷。

筛选的目的：获得杂交瘤细胞。

筛选的方法： 用选择性培养基来完成，即HAT培养基。

加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）及胸腺嘧啶核苷（T）的培养基称HAT培养基。

其中，氨基喋呤可阻断DNA合成的主要途径。主要途径阻断后，依靠应急途径即在HGPRT（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）和TK（胸苷激酶）作用下，利用胸腺嘧啶和次黄嘌呤合成DNA，缺少其中一种，DNA合成不能发生。

用于杂交的骨-髓瘤细胞系均由经有毒-药物诱导而成选择产生的代谢缺陷型细胞，细胞内均无TK或HGPRT，所以单个或融合骨-髓瘤细胞在HAT培养液中将死亡。B细胞虽然有HGPRT和TK，但在体外通常培养条件下，尤其是在单个细胞环境下难于长期存活和增殖传代。

因此，只有杂交瘤细胞才能在HAT培养液中生长繁殖。

即:

①淋巴细胞：不能生长，5到7天死亡；DNA的主要合成途径被A阻断。

②骨-髓瘤细胞：不能生长，5到7天死亡；HGPRT缺乏，DNA合成的旁路途经受阻。

③骨-髓瘤细胞和脾细胞融合形成杂交瘤细胞，可长期生长繁殖。利用淋巴细胞的HGRT将H合成为嘌呤碱并最-终与T一起合成DNA从淋巴细胞获得产生某种抗体的遗传信息，从骨-髓瘤细胞获得不断繁殖的能力。

由于通过以上方法选择出杂交瘤细胞，虽然都是杂交瘤细胞，但可能是同一抗原的不同抗原决定簇刺激产生的。所以产生抗体是不纯的。如果不进一步提纯，这样得到的是多克隆抗体，所以，需要第二次筛选。

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