斑马鱼甲状腺素（T4）酶联免疫分析试剂盒操作说明

本试剂盒仅供研究使用。检测范围：96T10μg/L-260μg/L使用目的：本试剂盒用于测定斑马鱼血清、血浆及相关液体样本中甲状腺素(T4)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中斑马鱼甲状腺素(T4)水平。用纯化的斑马鱼甲状腺素(T4)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入甲状腺素(T4)，再与HRP标记的甲状腺素(T4)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的甲状腺素(T4)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中斑马鱼甲状腺素(T4)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（480μg/L）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1、标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。240μg/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液120μg/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液60μg/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液30μg/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液15μg/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7、温育：操作同3。8、洗涤：操作同5。9、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。