Zxin小鼠血管内皮生长因子试剂盒操作手册

Zxin小鼠血管内皮生长因子试剂盒操作手册--上海沪鼎生物一、实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠血管内皮生长因子(VEGF)水平。用纯化的小鼠血管内皮生长因子(VEGF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血管内皮生长因子(VEGF)，再与HRP标记的血管内皮生长因子(VEGF)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的血管内皮生长因子(VEGF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠血管内皮生长因子(VEGF)浓度。二、标本要求1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。标本收集：1.收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。2.血浆抗凝剂推荐使用EDTA。避免使用溶血，高血脂标本。3.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。4.标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃，-70℃电冰箱内，避免反复冻融，3-6月内检测。在收集样本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本，及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本，及时分装后冻存在-20℃备用，有条件的，**-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融。三、“小鼠血管内皮生长因子试剂盒"操作示意图操作指南：固相包被→加待测样品→温育→洗涤+加酶标物→温育→洗涤→加底物→温育一加终止液→比色→判定结果四、注意事项1.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。2.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。3.请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。产品说明：本试剂盒仅供研究使用。