PAF蛋白;15KDA PCNA关联因子(PAF)重组蛋白
英文名称:Recombinant PCNA Associated Factor 15kDa (PAF)
p15(PAF); L5; OEATC1; NS5ATP9; Overexpressed In Anaplastic Thyroid Carcinoma 1; Hepatitis C virus NS5A-transactivated protein 9
来源:原核表达
宿主:E.coli
规格:10μg 50μg 200μg 1mg 5mg
内毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法测定)具体详见说明书
片段与标签:N-terminal His Tag
物种来源(人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猕猴、山羊、绵羊、马、牛、猪、鸡、狗等其他物种多物种)相同的名称,不同的物种
性状:冻干粉
表达系统: 大肠杆菌
产品纯度:>97%
保存条件:如果样品在2-4周内使用,可以在4°C低温储存。
长期储存,建议添加载体蛋白(0.1%HSA或BSA),并储存在-20~ -80°C。避免多次冻融。
PAF蛋白;15KDA PCNA关联因子(PAF)重组蛋白表达纯化:
联迈生物致力于为客户提供高纯度,低成本的活性重组蛋白,包括各类受体,细胞因子,生长因子,转录因子,激素、酶、蛋白、病毒抗原等,满足客户下游科研实验研究的需要。联迈生物拥有先进的蛋白表达技术及丰富的蛋白表达经验,完成了多种正常条件下不表达、难表达、表达量低的蛋白的制备。
PAF蛋白;15KDA PCNA关联因子(PAF)重组蛋白表达出来的蛋白比实际大小要小,这是为什么?
主要原因有如下几个方面
1. 蛋白本身被降解了,可以存在一些不利于该蛋白稳定的蛋白酶
2. 翻译起始位点的问题:如果一个类似于核糖体结合位点(AAGGAGG)的序列加上适当的间隔序列出现在了ATG密码子上游,降解就会有可能出现。解决的方法可以采用两端都带有融合标签的载体,例如pET系列部分载体在N-端和C-端都有His-Tag融合标签。这样,全长蛋白就可以通过提高咪唑浓度,在洗脱时将截短蛋白与全长蛋白区分开。或者在蛋白两端采用不同标签,进而通过亲和纯化的方式得到全长蛋白。
3. 影响蛋白稳定性的另外一个因素是与N端Met相邻的氨基酸,即N端原则,当下列氨基酸出现在N端时: Arg、 Lys、Phe、Leu、Trp和Tyr 蛋白的半衰期较短,蛋白会存在不稳定降解的问题,特别是Leu,当它出现在第二个位置上时,蛋白极度不稳定。在选择克隆位点时, Nco I 和Nde I都是 是一个比较好的N端的克隆位点选择,而使用NdeI的时候就要特别留意Leu的出现。
PAF蛋白;15KDA PCNA关联因子(PAF)重组蛋白如何提高蛋白的可溶性表达比例及表达量?
有些蛋白质表达水平低,或者表达的大多是包涵体,通常情况下通过基因优化,载体及菌株的筛选,表达条件优化,诱导条件优化等可以有效增加蛋白的可溶性比率及表达量。
1. 密码子优化
密码子优化是根据大肠对密码子的偏好性进行优化筛选,一般选择使用频率大于20%的密码子。经过优化的基因序列能提高mRNA二级结构的稳定性,避免因为不充足的tRNA库导致翻译延迟,成熟前翻译终止,翻译移码和氨基酸错配。
2. 降低蛋白表达速率
通过降低IPTG的诱导浓度,降低蛋白的表达速率。通过调节促使肽链聚集的速率与其折叠速率平衡,有利于提高蛋白的可溶性表达。
3. 温度
37度的表达条件往往会使一些蛋白形成包涵体,而30度的表达条件则可能产生可溶的或者有活性的蛋白。在某些条件下(12-20度)延长诱导时间(过夜)会使溶解性蛋白的产量达到大。
4. 细胞周质表达
我们可以选用一些将蛋白运输到细胞周质的载体。周质空间更有利于蛋白的正确折叠及二硫键的形成。常规选用的载体有pet22系列。但是我们要注意的是,有些蛋白并不适合于被运输到周质空间,比如一些与β-gal融合的周质的内部被证明是有毒的。
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