乳乳制品及饲料中三聚氰胺的测定

内容节点: 概述; 实验/设备条件; 样品提取; 实验/操作方法; 实验结果/结论; 仪器/耗材清单

三聚氰胺检测仪乳乳制品及饲料中三聚氰胺的测定 一．名词简介 1. 三聚氰胺理化性质 三聚氰胺：英文名melamine，简称三胺，学名三氨三嗪，别名蜜胺氰尿酰胺三聚酰胺分子式：C3N6H6C3N3(NH2)3；分子量：126.12；物理性能：白色结晶粉末，无毒，无味；相对密度：1570kg/m³；熔点：在常压下，354分解；升华温度：300；溶解性：能溶于甲醇甲醛乙酸热乙二醇甘油吡啶；微溶于水乙醇；不溶于苯和四氯化碳，水溶液呈弱碱性 化学性能：三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工原料，显弱碱性，能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐；在强酸或强碱液中，三聚氰胺发生水解，胺基逐步被羟基取代，生成三聚氰酸二酰胺三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸；三聚氰胺与醛类反应生成加成化合物；三聚氰胺与甲醛反应制成树脂，三聚氰胺树脂是一种多种用途的材料，防火耐热且有很高的稳定性，用于生产塑料地板砖，厨房用具，防火纤维，商业滤膜，胶水和阻燃剂 2. 乳制品 是指以生鲜牛（羊）乳及其制品为主要原料，经加工而制成的各种食品本标准所指的乳制品包括液体乳类（杀菌乳灭菌乳酸牛乳配方乳）乳粉类（全脂乳粉脱脂乳粉全脂加糖乳粉和调味乳粉婴幼儿乳粉其他配方乳粉）含乳饮料类炼乳类（全脂无糖炼乳全脂加糖炼乳调味炼乳；配方炼乳）乳脂肪类（稀奶油奶油无水奶油）干酪类（原干酪；再制干酪）乳冰淇淋类（乳冰淇淋乳冰）和其他乳制品类（干酪素乳糖乳清粉浓缩乳清蛋白）等 二．GX液相色谱法测定 1. 原理 试样经溶解超声提取沉淀蛋白过滤得到测试液，经GX液相色谱测定，根据保留时间和紫外吸收光谱定性，根据峰面积进行定量 2 试剂 方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为GB/T 6682-2008中一级用水，溶液为水溶液 2.1 磺基水杨酸 2.2 柠檬酸 2.3 辛烷磺酸钠：GX液相色谱离子对试剂 2.4 乙腈：色谱纯 2.5 盐酸 2.6 60 g/L磺基水杨酸：称取60 g磺基水杨酸用水定容至1 L 2.7 0.1 mol/L盐酸：量取8.3 mL盐酸用水稀释至1 L 2.8 缓冲液：柠檬酸和辛烷磺酸钠浓度均为10 mmol/L 2.9 三聚氰胺标准品：已知含量大于99% 2.10 标准储备液：称取三聚氰胺标准品0.01g（准确至0.0 001g），用甲醇配制成浓度为1mg/mL标准储备液 2.11 标准系列：将标准储备液用0.1 mol/L盐酸逐级稀释至0.25µg/mL，0.50µg/mL，1.00 µg/mL，2.00 µg/mL，4.00 µg/mL，5.00 µg/mL，10.0 µg/mL的系列标准溶液 3 仪器成套性 3.1 GX液相色谱仪 3.1.1 P3000型高压输液泵 3.1.2 UV3000紫外检测器 3.1.3 Rehodyne手动进样阀(20l) 3.1.4 CXTH3000色谱工作软件 3.1.5 ODS（VenusilASB-C18色谱柱） 250 mm×4.6 mm，5 µm 3.1.6 分析启动工具包 3.1.7 溶剂托盘 3.1.8 试剂包 3.1.9 保护柱和柱芯 3.1.10真空固相萃取装置（含混合型的阳离子交换柱10根） 3.2 溶剂过滤器（含真空泵） 3.3 超声波清洗器 3.4 柱温箱 3.5 高速离心机：转速>4 000 r/min 3.6 旋涡混匀器 3.7 分析天平：感量0.1mg 4 样品处理 4.1 固态乳制品 称取1.0 g左右试样（准确至0.0 001 g），加入0.1 mol/L 盐酸约15 mL，涡旋混匀，超声提取30 min后加入60 g/L磺基水杨酸6 mL ~8 mL，用0.1 mol/L 盐酸定容至25 mL，混匀后离心，上清液经0.45 µm的微孔滤膜过滤后进样 4.2 液态乳制品（包含酸奶） 称取15 g左右试样（准确至0.0 001 g），加入60 g/L磺基水杨酸3 mL~4 mL，用0.1 mol/L 盐酸定容至25 mL，混匀后离心，上清液经0.45 µm的微孔滤膜过滤后进样 4.3 饲料 称取1.0g左右试样（准确至0.0 001 g），将样品用研钵充分碾碎混匀，加入0.1 mol/L 盐酸约15 mL，涡旋混匀，超声提取30 min后加入60 g/L磺基水杨酸6 mL ~8 mL，用0.1 mol/L 盐酸定容至25 mL，混匀后离心，上清液经0.45 µm的微孔滤膜过滤后进样 5 测定步骤 5.1 色谱条件 5.1.1 色谱柱：ODS或C8，250 mm×4.6 mm，5 µm 5.1.2 流动相：缓冲液乙腈=8515 5.1.3 流速：1.0 mL/min 5.1.4 柱温：40 5.1.5 波长：240 nm 上述色谱条件是典型的，可根据实际情况做具体调整如果分离效果不理想，将水相改为：柠檬酸和辛烷磺酸钠浓度均为10 mmol/L，加3mL三，配制成1000mL溶液，流动相用氨水调PH值3.9到3.95 5.2 测定 5.2.1 标准曲线制备 将标准系列0.25µg/mL，0.50µg/mL，1.00 µg/mL，2.00 µg/mL，4.00 µg/mL，5.00 µg/mL，10.0 µg/mL分别进样20 µL,以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标作图，制作标准曲线 5.2.2 样品测定 取制备好的试样溶液进样20 µL,进行液相色谱分析根据保留时间和紫外吸收光谱定性，根据峰面积进行定量三聚氰胺的标准样品色谱图见图1，液态奶样品色谱图见图2，奶粉样品色谱图见图3 图1 标样色谱图 仪器：山东金普分析仪器有限公司LC3000 色谱柱：山东金普分析仪器有限公司ODS柱 250 mm×4.6 mm，5m 流动相：缓冲液乙腈=8515，用三调PH3.9 流速：1.0 mL/min 柱温：40 波长：240 nm 图2 液态奶样品色谱图 仪器：山东金普分析仪器有限公司LC3000 色谱柱：山东金普分析仪器有限公司ODS柱 250 mm×4.6 mm，5m 流动相：缓冲液乙腈=8515，用三调PH3.9 流速：1.0 mL/min 柱温：40 波长：240 nm 图3 奶粉样品色谱图 仪器：山东金普分析仪器有限公司LC3000 色谱柱：山东金普分析仪器有限公司ODS柱 250 mm×4.6 mm，5m 流动相：缓冲液乙腈=8515，用三调PH3.9 流速：1.0 mL/min 柱温：40 波长：240 nm 6 结果计算 6.1 计算 试样中三聚氰胺的含量（mg/kg）按式（1）计算: C×V X = （1） m 式中：X样品中三聚氰胺含量，mg/kg； C从标准曲线上查出的含量，µg/mL； V定容体积，mL； m称样量，g 平行测定结果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字 本文参考以下方法： HPLC-UV检测方法 三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差，需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离，按照美国食品药品监督管理局（FDA）的三聚氰胺检测方法和ZG农业部颁部的三聚氰胺检测方法，采用北京创新通恒科技有限公司的ODS，Ｃ１８色谱柱，能够得到良好的结果 1 三聚氰胺的FDA检测方法 色谱柱：山东金普分析仪器有限公司ODS 4.6×250mm 缓冲液：10mM柠檬酸，10mM辛烷磺酸钠，调pH为3.0 流动相：缓冲液：乙腈=85：15 进样量：样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL，进10L， 进样前用0.22m针式过滤器过滤 流速：1.0mL/min 柱温：40 波长：240nm 2三聚氰胺的ZG农业部颁标准检测方法 色谱柱：山东金普分析仪器有限公司ODS 4.6×250mm 缓冲液：10mM柠檬酸, 10mM庚烷磺酸钠 流动相：缓冲溶液:乙腈=85:15 进样量：样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL，进10uL 进样前用0.22m针式过滤器过滤 流速：1.0mL/min 柱温：40 波长：240nm 山东金普分析仪器有限公司技术部三聚氰胺检测仪