促胰岛素分泌肽(Exendin-4)是一种来源于美洲希拉毒蜥唾液中的含39个氨基酸的多肽,其作用机制与GLP-1类似,能够促进胰岛素的分泌、增加胰岛素敏感性、改善胰岛细胞功能。
促胰岛素分泌肽融合蛋白(Exendin-4-Fc fusion protein, 简称E4F4)是将Exendin-4与人IgG的Fc片段相连重新构建的结构蛋白,可在不影响药效的同时延长了药物的体内半衰期,有效改善Exendin-4 在机体内的药物代谢动力学特性。
本次分享的应用,作者采用了TSKgel G2000SWXL凝胶色谱柱建立了测定E4F4药物纯度的方法,经验证该方法适合E4F4纯度检测。
1. 分析条件
色谱柱: G2000SWXL (7.8 mmI.D.×30 cm, 5 μm)
流动相: 20 mMPBS(pH 6.8)
流速: 0.5 mL/min
进样体积: 50 μL
柱温: 20℃
检测器参数: UV@280 nm
2. 分析结果
图1 系统适用性色谱图
图2 专属性实验色谱图
3. 结果与讨论
采用TSKgel G2000SWXL色谱柱建立了促胰岛素分泌肽融合蛋白纯度测定方法,分离谱图见图1,空白溶剂在积分范围内无吸收峰出现,E4F4主峰的理论塔板数为4238 (>3000) ,对称因子为1.44 (>1.3)。
采用相对分子质量为60000的ATIII和相对分子质量为21000的 rh-CNTF为阴性对照,采集E4F4样品以及E4F4、ATIII、rh-CNTF混合样品的色谱图 (见图2) ,经计算,ATIII与E4F4分离度为 0.89,rh-CNTF与E4F4分离度均为4.32,3种样品分离度良好。
精密度测试结果,目标峰面积RSD为0.49% (n=6),保留时间RSD为0.11% (n=6),纯度RSD为0.01% (n=6)。以上结果说明该方法适合E4F4纯度检测。
HPLC方法的典型运行时间大约为20 min,并且有些方法还需要使用氯化溶剂利用UPC2技术,可在3 min
与其它现有的HILIC方法相比,CORTECSUPLC HILIC色谱柱能针对百草枯和敌草快提供更好的保留时
分析时间缩短约四倍,从而提高了常规样品分析的通量溶剂使用量与进样量降低约两倍可在HPLC仪器压力限值内(小于
CORTECS 2.7 m色谱柱由实心核颗粒以Zyou方式装填,设计用于GX高扩展性及高耐受性这其中也包括在
CORTECS C18 + 色谱柱利用低pH低离子强度的pH改性剂(比如甲酸),为碱性化合物分析提供优异的峰
在本次研究中,利用混合模式固相萃取(SPE)和表面带有少量正电荷的GX实心核颗粒色谱柱,在消除干扰的同时提高
作为高纯硅胶高品质的经典色谱柱代表,Symmetry®与SymmetryShieldTM色谱柱已经成
有相当多以前难分离的化合物如水溶性维生素丙烯酰胺糖类核苷磷酸盐等,用ACQUITY UPLC BEH Ami
本实验采用配有PDA和QDa质谱检测器的Alliance HPLC系统,利用CORTECS C18+, 2.