多重组合灵活应用 | 看安捷伦 N 糖样品前处理如何助力糖基化检测

糖基化是生物治 疗蛋白的一种重要的翻译后修饰过程。糖基化生物功能的重要性以及分析检测技术手段的不断提升，使得糖基化分析逐步从表征方法向工艺监控和放行检测方面拓展，2020 版药典增加单抗的 N- 糖检测标志着糖基化检测将在生物制药行业得到越来越深入的研究，并且广泛应用以确保生物治 疗蛋白的安全性和有效性。在此背景下，许多实验室希望能够获得一套完整而灵活、流程化和模块化操作的方案。

常见的 N- 糖表征方法包括酶促游离多聚糖的标记，以实现荧光检测（FLD）并增强质谱（MS）的电离。这些标记的多聚糖由液相色谱（LC） ，借助 FLD 进行相对定量分析，利用 MS 检测进行质量测定。亲水相互作用液相色谱（HILIC）是标记 N- 糖最常用的分离技术。

安捷伦现提供几种灵活而模块化样前处理选项来支持您的 N 糖检测，囊括了三代糖处理技术手段，包括：

1、最 新产品 Gly-X。该产品可将样品前处理时间缩短至 1 小时，采用 5 分钟的 PNGase F 酶解以及具有高 FLD 和 MS 信号的糖胺标记染料 InstantPC。另外可用 2-AB 和 APTS 进行标记，工作流程时间约为 2 小时

2、离心型试剂盒 GlykoPrep。该产品基于 2012 年推出的 AssayMAP 小柱，工作流程时间为 3–5 小时

3、用于传统 2-AB 标记方法的产品

安捷伦针对不同的应用场景，为您提供了几种可用于 N-糖样品前处理的组合选项。

套装一

药典 2-AB 标记方法的产品便捷经济标准版：

传统标记法的产品组合更经济，特别适合于样品通量不高的客户。传统的前处理工作流程包括使用 PNGase F 在天然或变性条件下的酶解、游离多聚糖纯化、荧光标记以及纯化标记的多聚糖。安捷伦有完善的一站式产品供应服务，提供整个流程中需要的高质量的试剂组分。

套装二

药典 2-AB 标记快速高效升级版：

使用 2-AB（2-氨基苯甲酰胺）生成标记的 N-糖数据已有 20 多年的历史，在许多实验室中均得到了良好的应用。AdvanceBio Gly-X（原 ProZyme）是新一代的 N-糖样品前处理技术。通过酶促反应快速（5 分钟）释放 N-糖，并用还原胺化染料进行标记。传统上，使用 2-AB 标记要求在标记反应前对样品进行干燥处理，而使用 Gly-X 2-AB Express 基质上标记则无需进行该步骤。样品前处理时间：约 2 小时。

套装三

InstantPC 标记快速高灵敏增强版：

Gly-X N-糖样品前处理工作流程可在 5 分钟内释放 N-糖，使用 InstantPC 进行即时糖胺标记，InstantPC 标记的多聚糖在正离子模式下显示出了更高的 FLD 信号和更高的 MS 电离效率，从而能够可靠地检测低丰度的多聚糖种类。

多聚糖标记的 FLD（A）和 MS（B）响应对比。

套装四

寡糖深度表征糖苷酶以及标准品套装专业版：

寡糖的深度表征需要采用“化整为零”的方式研究糖的结构，安捷提供用于研究的各种内切糖苷酶和外切糖苷酶，能够更清晰地呈现糖的结构。内切糖苷酶可将寡糖从糖蛋白及其他底物中释放出来。这些酶可用于糖蛋白的去糖基化以分析。外切糖苷酶是一种糖苷水解酶，可酶解末端残基的糖苷键。这些酶可用于研究游离的多聚糖、糖脂和糖蛋白，针对特定结合位点的外切糖苷酶也可用于寡糖的测序。

我们为您提供已标记的多聚糖标准品。支持 InstantPC、2-AB、2-AA 和 APTS 标记物，均可用于 LC/FLD、LC/MS、CE/LIF 和 CE/MS 等流程的定性工作。这些标准品涵盖了包括复杂二天线中性型与唾液酸化型、高甘露糖型以及 α-Gal 型的多种常见多聚糖类型。此外，我们还提供糖蛋白的多糖混标，如：人 IgG，牛 RNA 酶 B，牛胎球蛋白，人 α1-酸糖蛋白（AGP）， 中国仓鼠卵巢（CHO）细胞产生的重组单克隆 IgG（mAb）， 三天线和四天线唾液酸化 N- 糖混标。