使用ProtoGel30%进行电泳实验的使用及配比说明

ProtoGel30%

丙烯酰胺：甲叉丙烯酰胺：37.5:1

超纯稳定的溶液

SDS-PAGE电泳实验的方法

1.LaemmliSDS-PAGE凝胶配方

使用下表来确定配置不同百分比凝胶需要的试剂量。如果您电泳的凝胶百分比未包括在该表中，使用下面的公式来计算ProtoGel、ProtoGel配套的缓冲液以及其他试剂的需要量。

去离子水:46.2ml

去离子水:39.6ml

去离子水:32.9ml

去离子水:22.9ml

配置任何体积浓度的凝胶灌制液中所需ProtoGel的量都可以由下列公式计算：

这里，Vp=30%ProtoGel的量，X=凝胶中所需的单体的百分比，Vt=灌制液的总量

比如：制作100ml单体10%的凝胶，计算要添加的ProtoGel的量如下所示：

2.添加引发剂和灌制胶

为了达到Z佳的实验效果，在使用引发剂APS以及TEMED之前花10分钟真空脱除凝胶溶液中的气体。每100ml灌制液加入1.0ml10%（W/V）的过硫酸胺轻摇混合，之后每100ml灌制液加入0.1ml的TEMED轻摇混合，将溶液倾入凝胶灌制盒中，凝胶应该在10-20分钟之间开始凝固。为了避免形成不平的界面，在聚合凝固之前加入正丁醇饱和的水溶液压平界面。在灌制浓缩胶（具体操作见下一节）之前，用水将丁醇冲洗掉。

3.灌注浓缩胶

使用ProtoGelStackingBuffer配制10ml4%的浓缩胶：ProtoGel:1.3ml，ProtoGelStackingBuffer:2.5ml，去离子水:6.1ml。加入0.05ml10％过硫酸铵和0.01ml的TEMED，凝胶将开始在20分钟内开始凝固。

注：可以使用0.5MTris-HCl,0.4%SDS,pH6.8的溶液替代ProtoGelStackingBuffer。

4.选择电泳缓冲液

LaemmliSDS-PAGE：对大多数SDS-PAGE电泳实验来说，1XTris-甘氨酸SDS是Z适合的电泳槽缓冲液。

小分子量SDS-PAGE(<20kD)：NationalDiagnostics公司独特的Tris-三甲基甘氨酸-SDS电泳缓冲液有效分离较小的蛋白质，而无需完全遵循Schagger-VonJagow的方法。

ProtoGel使用安全提示

风险：可能致癌。可能引起遗传性基因损害，此外与皮肤接触及吞食均有毒。长期吸入、与皮肤接触或者误吞都会对健康产生严重危害。

确保安全：避免直接接触，使用前需获取专业指导。如有意外发生或感觉不适，请立即就医（尽可能到处粘贴此提示）。

电泳实验过程中可与ProtoGel30%相配套使用的产品及其货号

原英文版PDFhttps://www.nationaldiagnostics.com/sites/default/files/ec890_protocol.pdf

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