小鼠GRO/KCELISA检测试剂盒

小鼠GRO/KCELISA检测试剂盒
日本IBL进口原装货号:27137规格：96T
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前言简介
小鼠趋化因子GRO/KC是一种的嗜中性趋化因子,与人GRO为同源物,为单核细胞和中性粒细胞的化学诱导物.据报道它是由激活的单核细胞和纤维原细胞产生的
原理
此试剂盒运用了两种特异性抗体,洗板后加入TMB底物液显色,显色的强度与小鼠GRO/KC的量成正比.

检测范围
23.44~1,500pg/mL

预期用途

■此IBL试剂盒能用于小鼠血清,EDTA血浆,细胞上清中GRO/KC的定量检测

■重组和天然的小鼠GRO/KC都可以检测

试剂盒成分
1预包被板:抗小鼠GRO/KC兔子IgG,亲合纯化96T
2酶标记抗体:
（30倍浓缩）HRP标记抗小鼠GRO/KC兔子IgG,亲合纯化0.4mLx1
3标准品:重组小鼠GRO/KC0.5mLx2
4EIA缓冲液:含1%BSA,0.05%吐温20BPS30mLx1
5标记抗体稀释液:含1%BSA,0.05%吐温20BPS12mLx1
6显色剂:TMB底物液15mLx1
7终止液:1N硫酸12mLx1
8浓缩洗涤液:
（40倍浓缩）含1%BSA,0.05%吐温20BPS50mLx1


操作说明
1实验所需器材（但试剂盒没有提供）
酶标仪（450nm）微移液管及其枪头
量筒及烧杯蒸馏水
冰箱（4°C）坐标纸（log/log）
吸水纸试管（用于标准品稀释）
温育箱（37°C±1°C）
洗瓶（用于洗板）
一次性试剂管（用于浓缩酶标记抗体和显色剂）
2准备

试剂盒的洗涤液是一种40倍浓缩液,用1950mL蒸馏水稀释50mL的浓缩洗涤液,制成2000mL即用稀释洗涤液.置于冰箱内可保存2周.

试剂盒中的标记抗体是一种30倍浓缩物,根据所需量,用标记抗体稀释液稀释30倍.
示例:
如果你用一条板（8孔）,就需800μL.的标记抗体.就用870μL的标记抗体稀释液稀释30μL抗体浓缩液,充分混匀.并每孔各加100μL
浓缩酶标记抗体需稀释后才能用于实验
剩余的稀释标记抗体液需密封瓶装,存于4°C

加0.5mL的蒸馏水到瓶装标准品,制成浓度为3,000pg/mL小鼠GRO/KC标准品液

准备8支试管,并每支各加230μLEIA缓冲液.稀释成如下浓度,步骤如下图所示:
试管11,500pg/mL
试管2750pg/mL
试管3375pg/mL
试管4187.5pg/mL
试管593.75pg/mL
试管646.88pg/mL
试管723.44pg/mL
试管80pg/mL（样品空白对照）
吸取230ul的标准品液于1号管混匀，然后从1号管吸取230ul加入2号管混匀，如下图所示,按此规律稀释，标准品浓度范围为23.44-1500pg/mL,第8号管为0pg/mL作为样品空白对照

样品如需稀释时,必须用EIA缓冲液进行稀释
如果样品中小鼠的GRO/KC的浓度范围一无所知的话,预先准备几个不同稀释梯度的样品液来确定Z佳的检测浓度.
3实验步骤
使用前，将所有试剂应平衡至室温，大约30min，充分混匀，确保试剂质量无改变，标准曲线和样品检测必须同时进行.

1）设试剂空白对照，并于相应的微孔中加入100ulEIA缓冲液
2）确定好样品空白对照孔，检测样品孔和标准品孔，分别将100ul样品对照品（8号管）、检测样品和稀释好的标准品（1-7号管）加入到相应的微孔中。
3）盖板，37°C下温育1小时
4）用洗涤瓶剧烈洗板,再加入稀释洗涤液,静置15-30秒,再彻底倒去孔内反应液
重复洗板7次.
Z后在吸水纸上拍干,去除残留液滴
如用自动洗板机洗板,先自动洗4次,再按上述用洗瓶手工洗3次
5）除试剂空白对照孔外,其余每孔各加100ul酶标抗体
6）盖板，37°C下温育30min
7）按照上述步骤4）洗板9次
8）用一次性试管取所需量的显色剂，各加100ul显色剂于微孔中.为了避免污染，勿将剩余试剂在倒回试剂瓶中
9）室温避光温育30min，加入显色剂后溶液颜色会变成蓝色
10）每孔各加100ul终止液，溶液颜色会变成黄色
11）擦去微孔板底部的污迹或水滴，确保微孔内溶液无气泡产生.加入终止液后30min内于酶标仪450nm处读取结果


特别注意

结果计算
所有实验数据（包括标准品,检测样品的OD值）,都应减去样品空白对照的OD值.
在log-log坐标纸用,以较正的OD值为纵坐标,相对应的浓度为横坐标,建立标准曲线.样品直接在标准曲线上获取浓度值.
标准曲线示范


上图所示典型标准曲线仅用于演示示范,不能用于试验数据的获取.每次实验都应建立其标准曲线.

使用及处理常规注意事项
1所有试剂置于2-8°C保存.实验前将试剂平衡至室温（约30分钟）
2瓶装标准品是冻干品,故小心打开瓶盖
3终止液是强酸物质.使用时,避免其接触皮肤和衣肤.
4弃置用过的物质前,用水冲洗
5浓缩酶标抗体,EIA缓冲液和浓缩洗涤液可能会出现沉淀,但这并不会影响实验
6使用试剂后应洗手
7切勿混用不同批号的试剂
8别使用过期的试剂
9试剂盒仅供研究用,不能用于临床诊断.


存储与有效期
存储条件:2-8°C
有效期见试剂盒外包装

本译文仅供参考，详情请以原文为准。

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