新生牛血清的筛选-动物细胞培养

来源：内容来源于网络浏览量：1258次

【导读】新生牛血清的筛选实验目的：了解牛血清在细胞培养中的作用，掌握血清筛选技术。实验原理：牛血清是细胞培养基中重要的成分之一，对细胞生长有广泛的影响。在培养系统中加上适量的血清，首先可以...

新生牛血清的筛选实验目的：
了解牛血清在细胞培养中的作用，掌握血清筛选技术。

实验原理：
牛血清是细胞培养基中重要的成分之一，对细胞生长有广泛的影响。在培养系统中加上适量的血清，首先可以补充细胞生长所需的生长因子、激素、贴附因子等；其次，它具有作用，能解除脂肪酸、重金属和某些蛋白酶的毒性；再有，它还能终止胰蛋白酶的作用，并保护细胞免受机械损伤等。但是血清成分复杂，不同来源、不同批号生产的血清对细胞生长的作用差异较大。又因血清只能保存1年左右，随着存放时间的延长，营养价值会逐渐降低。所以在购买血清或进行某一项重大的实验时，应首先对牛血清进行筛选，试验它们对细胞生长的作用。

　　在作牛血清筛选时，为严格起见，往往选用2种不太好养的细胞作实验，通常一种是正常二倍体细胞，另一种是不太容易培养的肿瘤细胞，也可以使用本实验室正准备培养的细胞。另外，除了几种待筛选的未知血清，Z好还有已知的优良血清作为对照，这样做出的结果才有分析和比较的意义。

实验材料：
***材料：96孔培养板，刻度吸管，移液管，试管，吸管，废液缸，血球计数板，计数器，培养细胞。***药品：培养基（RPMI1640或DMEM），几种批号的待检小牛血清和正在使用的小牛血清，0．25％胰蛋白酶（胰酶）溶液。
***仪器：CO2培养箱，超净工作台，微量加样器。

实验步骤：

1．取2种不同的培养细胞，Z好一种是正常二倍体细胞，另外一种是肿瘤细胞。胰酶消化后用无血清培养基吹打下来制成细胞悬液，镜下计数并计算细胞浓度。用含10％待测血清的培养基将细胞稀释到一定倍数。

2．在经无菌处理的96孔板各孔中分别加入含10％待测或已知血清的培养基100μm。一般每一行加入一种血清样本，不同的行加入不同的血清样本。

3．以每排Z后一个孔Z终加入1个细胞计算，按2“递增计算第1个孔应加入的细胞个数。即从Z后一个孔算起，向前依次为1个、2个、4个、8个、16个、32个、64个、128个、256个、512个、1028个、2056个细胞，则96孔板的第1列的每个孔应各加入2000个细胞左右。将细胞稀释成4000个／100μL培养基（使用含待测血清样品的培养基），在第1孔中加入100μL细胞悬液，与原在孔中的培养基混匀后取出100μL放人第2孔中，再与第2孔中的培养基混匀后取出100μL加入第3个孔中，依此类推直至Z后一个孔，再从Z后一孔中取出100μL细胞悬液弃掉。

如图231所示：

这样倒数第2个孔有2个细胞，倒数第3个孔有4个细胞，依此类推。

4．在逐步稀释每孔细胞后，每孔再加入100μL含不同血清的培养基。如此各排加入不同稀释度的细胞，每排使用不同的牛血清。

5．将此96孔板放人C02培养箱中培养1周（有时3d也可以）。

6．培养结束后取出96孔板，观察比较在同一细胞浓度下不同血清的细胞生长状况，在同一细胞浓度下细胞生长数Z多的培养基所含的血清即可作为被选择的血清样品。一般将稀释倍数较高的细胞作为主要观察范围。

仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。

2004-11-27 09:40:25

标签：

收藏(0) 赞(0) 踩(0)

随时了解更多仪器资讯，求购、招标、中标信息实时更新，厂商招商信息随时看。大量、齐全、专业的仪器信息尽在仪器网（yiqi.com）。扫一扫关注仪器网官方微信，随时随地查看仪器用户采购、招标需求！

您可能感兴趣

人多发性瘤细胞培养总结2004-09-27 09:23:05

1、什么是细胞培养培养的细胞由于细胞增殖，数量增加，细胞难以继续生长繁殖，需要进行分瓶培养，将培养的细胞分散
细胞培养室的卫生如何清洁？2004-07-09 09:55:17

细胞培养室卫生清理：1、培养室要制定合理的卫生制度安排，一般每周打扫次，打扫范围包括：特殊角落仪器设备阻挡处
细胞培养箱的清洁2004-07-09 09:55:17

细胞培养是以一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞的一个过程，整个过程对培养环境的要
细胞培养新宠CELLine 生物反应器狂热来袭2004-07-10 09:35:13

Wheaton 的CELLine 生物反应器采用细胞室与培养基室半透膜分离培养技术，突破了传统细胞培养的空
细胞培养的三不要2004-07-12 15:05:27

细胞培养的三不要
多年细胞培养者的培养经验2004-07-12 15:05:27

多年细胞培养者的培养经验
细胞培养中的黑胶虫污染及解决方案2004-07-13 09:31:27

细胞培养中的黑胶虫污染摘要：预防和避免污染是细胞培养成功的关键，黑胶虫（也称黑焦虫）是近几年来几乎
细胞培养过程中液氮罐的使用2004-07-14 10:19:49

　　细胞培养的一般过程，主要包括准备、取材、培养和冻存复苏4步。为保存细胞，特别是不易获得的突变型
细胞培养基和血清的选择2004-07-16 10:28:52

细胞培养是实验室里最常见和最基本的实验了，但却不是最简单的。别小看细胞培养，这里可蕴含着大学问。有
细胞培养对摇床的选择2004-07-17 14:27:07

　　细胞培养需要适宜的生长环境和生长温度，这需要选择合适的摇床或则振荡器进行辅助。应用大肠杆菌培养

版权与免责声明

①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布，观点仅代表作者本人，不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益，请及时告诉,我们立即通知作者，并马上删除。

②凡本网注明"来源：仪器网"的所有作品，版权均属于仪器网，转载时须经本网同意，并请注明仪器网(www.yiqi.com)。

③本网转载并注明来源的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品来源，并自负版权等法律责任。

④若本站内容侵犯到您的合法权益，请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱：hezou_yiqi