- 2024长江经济带(武汉)水务科技博览会精彩回顾
- 中丹乳企,共谋国际乳业合作
- 破乳剂 Fluo-Break / Drop-Break 使用步骤
- 特洁安Aquafine助力成都光伏厂客户降本增效
- 展会回顾|指尖上的仪器“福州”人生初见暨广州市仪器行业协会福州行
- 神开股份与瀚氢动力签署股权投资协议,布局新能源
- 机器学习与连续流连载系列丨使用康宁反应器集成在线光谱,通过半监督机器学习识别化学反应式计量和动力学模型
- 地下水位监测站产品交流会-云境天合
- 来源:内容来源于网络 浏览量:657次
- 【导读】ELISA原理、特点、操作及注意事项一、Elisa的基本原理通过抗原与抗体的特异性免疫反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定。测定的对象可以是抗原也可以是...
ELISA原理、特点、操作及注意事项
一、Elisa的基本原理
通过抗原与抗体的特异性免疫反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定。测定的对象可以是抗原也可以是抗体。
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化水解或氧化还原反应而成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。
所生成有色产物的颜色深浅与欲测的抗原(抗体)含量成正比。这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察,也可以用分光光度计(酶标仪)加以测定。其方法简单,方便迅速,特异性强。二、Elisa法的特点
该法相较其他方法而言,有几大特点:
1、灵敏性高
该测定法的灵敏度来自作为报告集团的酶。众所周知,酶是一种有机催化剂,很少量的酶即可诱导大量的催化反应,产生可供观察的显色反应现象。因此该体系常被称为酶放大体系。ELISA实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位,或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量。
2、特异性强
其特异性来自抗体或抗原的选择性。抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系,所以抗原抗体反应具有高度的特异性。三、注意事项
1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2. 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2)包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的Z适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值Zda而蛋白量Z少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
我公司主营生物试剂、标准品、试剂盒、培养基、血清、细胞、细胞因子、抗体等,有任何问题欢迎广大客户来电咨询!
96T检测84个样本,12孔用于绘制标准曲线
48T检测42个样本,6孔用于绘制标准曲线
我们对客户的承诺:
1.有质量问题免费包换.(质量问题包括运输不当,客户在使用过程中测不出结果,等等!)
2.全程技术指导。(包括售前的标本收集,使用过程中不明白的地方,实验结束后的数据分析,有任何疑问,我们技术都会即时给你去电)
3.提供免费代测的服务。(你只需把标本寄过来,我们为你节省时间,帮你出结果,原始数据,分析数据均可提供,一般时间是5天左右)
4.客户有任何问题,我们都是在一个工作日之内给出解决方案。售后和技术这一块都是竭诚为客户服务
仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
相关热词:
等离子清洗机,反应釜,旋转蒸发仪,高精度温湿度计,露点仪,高效液相色谱仪价格,霉菌试验箱,跌落试验台,离子色谱仪价格,噪声计,高压灭菌器,集菌仪,接地电阻测试仪型号,柱温箱,旋涡混合仪,电热套,场强仪万能材料试验机价格,洗瓶机,匀浆机,耐候试验箱,熔融指数仪,透射电子显微镜。
- 2004-11-28 09:23:14
- 标签:
- 收藏(0) 赞(0) 踩(0)
- 随时了解更多仪器资讯,求购、招标、中标信息实时更新,厂商招商信息随时看。大量、齐全、专业的仪器信息尽在仪器网(yiqi.com)。扫一扫关注仪器网官方微信,随时随地查看仪器用户采购、招标需求!
-
在ELISA实验前的注意事项2004-07-23 16:27:07
在ELISA实验前的注意事项上海易利生化试剂有限公司是一家专业经营elisa,试剂盒,试剂等科研产
-
操作elisa的方法与注意事项2004-12-02 09:23:11
似乎很多做elisa实验的人都非常关注它的操作方法,其次就是它的原理啊概念啊什么的,其实还需要较为关注的就是
-
酶联免疫Elisa试剂盒的注意事项2005-01-27 09:23:09
酶联免疫Elisa试剂盒注意事项⒈正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,
-
ELISA实验前的注意事项2004-07-25 09:29:06
目前很多人在订购ELISA试剂盒的时候会问到一些关于试剂盒的实验操作步骤及应注意的哪些问题,下面
-
使用ELISA试剂盒的注意事项2004-11-28 09:23:14
上海恒远供应各种种属ELISA试剂盒。种类齐全!对于ELISA试剂盒的储存应该按照标签说明书,使用前应该恢复
-
国产elisa试剂盒的注意事项有哪些?2004-09-12 09:23:03
国产elisa试剂盒在使用时需要将溶液在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀,使温度与成分均一,减少沉淀的发生,切勿
-
ELISA中的洗涤注意事项2004-11-27 09:40:25
洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤,但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合
-
上海沪鼎分享使用ELISA试剂盒时注意事项2004-12-02 09:23:11
ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的
-
ELISA实验的注意事项2004-07-23 16:27:07
ELISA实验的注意事项上海易利生化试剂有限公司是一家专业销售ELISA试剂盒等科研产品的公司,以
-
ELISA实验前务必注意事项2004-07-25 09:29:06
目前很多人在订购ELISA试剂盒的时候会问到一些关于试剂盒的实验操作步骤及应注意的哪些问题,下面我
恒远du家与您分享ELISA原理、特点、操作及注意事项
-
您可能感兴趣
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。
②凡本网注明"来源:仪器网"的所有作品,版权均属于仪器网,转载时须经本网同意,并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi