细胞周期检测方法（PI法）

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【导读】细胞周期检测染料：可用于细胞周期检测的荧光染料有碘化丙啶（Propidium，简称PI）、4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole...

细胞周期检测染料：
可用于细胞周期检测的荧光染料有碘化丙啶（Propidium，简称PI）、4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole，简称DAPI)、Hochest、7氨基放线菌素（7-Amino-ActinomycinD，简称7AAD）等。

细胞周期PI法原理：

PI法是较常见的一种周期检测方法。PI是一种双链DNA的荧光染料，与双链DNA结合后可产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被PI染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可进行细胞周期分析。PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。

细胞周期检测步骤：

1.细胞样品的准备：
收集细胞，用1ml预冷PBS洗1遍，轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
2.细胞固定：
加入1ml预冷的70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4度固定2小时或更长时间（固定12-24小时可能效果更佳）。1000g离心3-5分钟，沉淀细胞（如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或加大离心力）。弃上清，用用1ml预冷PBS洗1遍。
3.PI染色：
每个样品用0.5ml染色缓冲液（或PBS）重悬，加入25ulPI染色液（20×）、10ulRNaseA（50×）。37度避光温浴30分钟。
4.流式检测：
用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。

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2004-12-01 09:23:08

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