GX液相色谱法测定决明子中蒽醌类成分的含量

【摘要】　　目的测定决明子中5种蒽醌类成分的含量。方法采用GX液相色谱法。色谱柱：Shim-packCLC-ODSC18柱；流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱；流速：1ml/min；λ：440nm。结果该方法准确可靠，重现性好。结论该方法可以测定决明子中5种蒽醌类成分的含量。

　　【关键词】GX液相色谱法决明子蒽醌

　　Abstract：ObjectiveTodeterminethecontentofanthraquinonesinSemenCassiae.MethodsHPLCmethodwasdeveloped.TheseparationwasperformedonanODScolumnwiththemobilephaseofCH3OH-0.1%phosphoricacid.Theflowratewas1ml/minandthedetectionwavelengthwas440nm.ResultsThismethodwasconvenientandreliable.ConclusionThismethodcanbeusedtodeterminethecontentofanthraquinonesinSemenCassiae.

　　Keywords：HPLC;SemenCassiae;Anthraquinones

　　决明子为豆科植物决明CassiaobtusifoliaL.或小决明CassiatoraL.的干燥成熟种子。性味甘、苦、咸、微寒，归肝、大肠经。具有清肝明目、润肠通便之功效，为临床常用中药［1］。其主要化学成分为蒽醌类化合物。本实验采用HPLC法同时测定了决明子中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量，为决明子中有效物质研究奠定了基础。

　　1仪器与材料

　　LC-l0ATvpGX液相色谱仪（日本岛津公司），AEG-45SM电子天平（十万分之一），大黄素（批号0756200009）,大黄酚（批号110796200513）,大黄素甲醚（批号07589803）（均购自ZG药品生物制品检定所），决明子（重庆合川GAP种植基地，由重庆市中药研究院生药室提供并鉴定），水为重蒸水，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

　　2方法与结果

　　2.1对照品溶液的制备分别精密称取芦荟大黄素0.53mg,大黄酸0.58mg,大黄素0.55mg,大黄酚0.53mg,大黄素甲醚0.58mg，加甲醇超声溶解,分别定容至5ml,作为对照品溶液。

　　精密吸取上述5种对照品溶液各2.0ml，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，即得混合对照品溶液，其浓度分别为芦荟大黄素0.0212mg/ml，大黄酸0.0232mg/ml，大黄素0.022mg/ml，大黄酚0.0212mg/ml，大黄素甲醚0.0232mg/ml。

　　2.2供试品溶液的制备取决明子药材粉末（过4号筛）约1g，精密称定，置索氏提取器中，加80%乙醇100ml回流提取至无色，合并提取液，定容至100ml，精密吸取25ml提取液，经减压回收后，残渣加浓度为1mol/L盐酸溶液40ml回流水解3h，然后用120ml氯仿分4次回流萃取，30ml/次，合并氯仿萃取液并加适量蒸馏水洗至中性，回收氯仿。残渣甲醇仿溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得［2，3］。

　　2.3色谱条件色谱柱为Shim-packCLC-ODSC18（6.0mm×150mm,5um）；流动相为甲醇－0.1%磷酸水溶液梯度洗脱；流速1ml/min；柱温25℃；检测波长440nm.

　　2.4标准曲线的绘制分别精密吸取混合对照品溶液8，10，12，14，16μl进样，测定基线构成之面积称峰面积。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064Wh/2h>峰面积，绘制标准曲线，计算混合对照品中各对照品的回归方程及线性范围，结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的回归方程分别为：Y=814521X-20442，Y=1110506X-7296，Y=1431202X+4274，Y=1739861X-24381，Y=707106X-26453，其线性范围分别为：0.170～0.339，0.186～0.371，0.176～0.352，0.170～0.339，0.186～0.371μg。

　　2.5精密度实验精密吸取混合对照品溶液10μl，进样，测定各峰峰面积，连续测定5次，求得各峰面积值的相对标准偏差（RSD）分别为：芦荟大黄素0.7%，大黄酸1.8%，大黄素0.6%，大黄酚1.1%，大黄素甲醚1.4%。结果表明仪器精密度良好。

　　2.6稳定性实验

　　2.6.1对照品溶液稳定性实验精密吸取混合对照品溶液10μl，进样，分别于0，2，4，8，12，24h后重复进样，计算各成分峰面积值的相对标准偏差（RSD）分别为：芦荟大黄素0.9%，大黄酸0.8%，大黄素0.7%，大黄酚1.2%，大黄素甲醚1.3%。结果表明混合对照品溶液在24h内基本上是稳定的。

　　2.6.2供试品溶液稳定性实验精密吸取供试品溶液10μl，进样，分别于0，2，4，8，12，24h后重复上述操作，计算各成分峰面积值的相对标准偏差（RSD）分别为：芦荟大黄素0.6%，大黄酸0.7%，大黄素1.3%，大黄酚0.6%，大黄素甲醚1.7%。结果表明供试品溶液在24h内基本上是稳定的。

　　2.7重现性实验精密称取决明子药材5份，照“2.2”项下供试品溶液的制备方法制备供试液，精密吸取供试品溶液10μl，进样，测定各成分峰面积值，计算各成分平均含量及RSD值分别为：芦荟大黄素为0.0084%，RSD为0.8%；大黄酸为0.0079%，RSD为1.1%；大黄素为0.0313％，RSD为1.2%；大黄酚为0.1732%，RSD为0.7%；大黄素甲醚为0.0883%，RSD为1.3%。结果表明，该方法具有较好的重现性。

　　2.8加样回收率实验精密称取决明子药材6份，每份约0.5g，精密称定，分别精密加入大黄酚对照品（50μg/ml）15ml。照“2.2”项下供试品溶液的制备方法制备供试液，精密吸取供试品溶液10μl，进样，测定大黄酚的峰面积。结果见表1。

　　表1大黄酚回收率测定结果（略）

　　表1表明，大黄酚的平均回收率为100.94%，RSD值为2.12%。表明该测定方法是合理可行的。

　　2.9样品的含量测定取不同批次决明子药材粉末（过4号筛）各约1g，精密称定。照“2.2”项下供试品溶液的制备方法制备供试液，精密吸取各供试品溶液10μl，按“2.3”项下色谱条件进样，混合对照品及样品色谱图见图1～2。测定对照成分峰面积，计算含量，即得。测定结果见表2。

　　图1决明子混合对照品色谱图（略）

　　图2决明子药材色谱图（略）

　　表2样品含量测定结果（略）

　　3结论

　　结果测得，决明子药材中含芦荟大黄素平均为0.0081%，大黄酸平均为0.0079%，大黄素平均为0.0306%，大黄酚平均为0.1760%，大黄素甲醚平均为0.0883%。

　　本文采用GX液相色谱法同时测定决明子药材中5种蒽醌类成分的含量，方法简便，分离度好，结果可靠，可用于控制决明子药材的质量。

　　【参考文献】

　　［1］国家药典委员会.ZG药典,Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社,2005:98.

　　［2］杨黎燕.杨秉勤,郎惠云.决明子蒽醌提取方法的研究［J］.西部粮油科技,2003,28（2）：59.

　　［3］蒋午峻，王巧，袁志芳,等.GX液相色谱法同时测定决明子中大黄素、大黄酚和大黄素甲醚［J］.河北医科大学学报,2006,27（4）：271.

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