琼脂糖凝胶电泳条件

琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法.其分析原理与其他支持物电泳的Z主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。
琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相当大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道，现广泛应用于核酸的研究中。
琼脂糖凝胶电泳条件
电泳缓冲液的pH在6~9之间，离子强度0.02~0.05为Z适。琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广。普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb，利用脉冲电泳，可分离高达10^7bp的DNA片段。
琼脂糖凝胶电泳为什么会形成条带
琼脂糖凝胶电泳是基因工程实验室中分离鉴定核酸的常规方法.核酸是两性电解质,其等电点为pH2-2.5,在常规的电泳缓冲液中（pH约8.5）,核酸分子带负电荷,在电场中向正极移动.核酸分子在琼脂糖凝胶中泳动时,具有电荷效应和分子筛效应,但主要为分子筛效应.因此,核酸分子的迁移率由下列几种因素决定：
（1）DNA的分子大小.线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶电泳中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,也越难于在凝胶孔隙中移动,因而迁移得越慢.
（2）DNA分子的构象.当DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关.相同分子量的线状、开环和超螺旋质粒DNA在琼脂糖凝胶中移动的速度是不一样的,超螺旋DNA移动得Z快,而开环状DNA移动Z慢.如在琼脂糖凝胶电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还是因为含有其他DNA引起时,可从琼脂糖凝胶上将DNA带逐个回收,用同一种限制性内切酶分别水解,然后电泳,如在凝胶上出现相同的DNA图谱,则为同一种DNA.
（3）电源电压.在低电压时,线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比.但是随着电场强度的增加,不同分子量的DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长,片段越大,因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大,因此电压增加,琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小.要使大于2kb的DNA片段的分辨率达到Zda,所加电压不得超过5v/cm.
（4）离子强度影响.电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率.在没有离子存在时（如误用蒸馏水配制凝胶）,电导率Z小,DNA几乎不移动；在高离子强度的缓冲液中（如误加10×电泳缓冲液）,则电导很高并明显产热,严重时会引起凝胶熔化或DNA变性.
琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在琼脂糖凝胶电泳中带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。

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