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- 【导读】建立ELISA抗体捕获法用于检测HCMVpp65特异性IgM,以确定感染状态,为HCMV活动性感染诊断试剂盒的研发提供理论和实验依据。方法:将HCMVAD169株感染HF细胞,粗提...
建立ELISA抗体捕获法用于检测HCMVpp65特异性IgM,以确定感染状态,为HCMV活动性感染诊断试剂盒的研发提供理论和实验依据。方法:将HCMVAD169株感染HF细胞,粗提HCMV抗原;通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和Western-blotting筛选出HCMVpp65抗原,测定pp65抗原效价及其和特异性抗体的亲和力:用辣根过氧化物酶(HRP)标记HCMVpp65单克隆抗体(McAb)。通过抗人μ链包被微量滴定板,先后加待检血清和pp65抗原-酶标McAb复合物,建立ELISA捕获HCMVpp65特异性IgM抗体方法学。用该法检测30份儿童、30份孕妇和28份免疫缺陷者的临床血清样本,并用DIESSE公司酶免疫HCMVIgM检测试剂盒同步检测。结果:制备的HCMV-pp65抗原PAGE胶上位于65KDMarker处,呈单一条带,抗原效价为1:100;HRP-MCAb免疫双扩效价为1:32;检测系统各反应物的Z佳稀释度为抗人μ链0.75μg/孔,待检血清为1:100,HCMV抗原为1:100,HRP-McAb1:20:两种方法的各组阳性率分别为6.7%、13.3%、10.7%和10%、13.3%、14.3%,总符合率为91%。结论:首次建立了简便、快捷、特异性和敏感性均较高的ELISA捕获HCMVpp65特异性IgM抗体法,其检测结果与DIESSE公司酶免疫HCMVIgM检测试剂盒的总符合率为91%。可用于儿章、孕妇和免疫力低下者,诊断HCMV活动性感染。
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- 2004-09-07 09:23:12
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