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可诱导表达脑啡肽的大鼠星形胶质细胞株的构建

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构建受QL霉素诱导表达脑啡肽的大鼠星形胶质细胞株(IAST). 方法:应用分子克隆技术构建含人前脑啡肽原基因(hPPE)的逆转录病毒四环素反应质粒(pRevTRE/hPPE);以脂质体转染法将重组质粒pRevTRE/hPPE和调节质粒pRevTetOn分别转染入包装细胞PT67,分别收集病毒上清;将含有RevTetOn病毒上清感染IAST,挑选单克隆并瞬时转染报告质粒pRevTRELuc,通过检测萤光素酶活性,挑选出QL霉素诱导表达高背景表达低IAST/TetOn细胞株;再将RevTRE/hPPE病毒上清感染IAST/TetOn细胞株,得到稳定表达脑啡肽的IAST/TetOn/hPPE细胞株,通过RTPCR免疫细胞化学及间接免疫荧光染色检测该细胞株中QL霉素定量调控脑啡肽的表达. 结果:重组逆转录病毒载体pRevTRE/hPPE构建成功;经挑选得到了高表达低背景IAST/TetOn细胞株,其诱导倍数为20.6;在IAST/TetOn/hPPE细胞株中,hPPE基因表达受QL霉素调控,呈剂量依赖关系. 结论:成功构建了受四环素及其衍生物QL霉素定量调控表达脑啡肽的永生化IAST,为可调控基因ZL慢性疼痛的研究奠定了基础. 超声波细胞破碎机(智能型超声波细胞粉碎仪)
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