采用双三元液相色谱(Dual gradient liquid chromatography,DGLC)建立了在线固相萃取技术与电喷雾串联质谱联用方法(Online SPE DGLC鄄ESI MS / MS),并成功应用于实际样品检测。本方法同时检测大豆不同部位中的 4 种酸碱性植物激素(赤霉素(GA3)、吲哚乙酸(IAA)、玉米素(ZT)和脱落酸(ABA))。通过考察固相萃取富集柱、分析色谱柱、流动相对植物激素的保留和选择性的影响,获得较高的灵敏度、回收率、稳定性及精密度。大豆样品经液氮低温研磨,以 80% 甲醇溶液提取,再经离心稀释过滤后,进样分析。进样后样品经在线固相萃取 Hypersep Retain AX 柱洗脱保留,目标分析物依次转移至分析柱Acclaim PA2 色谱柱,并以 0. 1% 甲酸和甲醇溶液作为流动相进行梯度洗脱,采用选择反应监测离子模式(SRM)同时采集正负离子通道进行定性分析,基质标准曲线外标法进行定量分析,GA3, IAA, ZT 在 0. 1 ~ 50 滋g / L 范围内线性良好,检出限为0. 0002 滋g / g; ABA 在 0. 5 ~ 50 滋g / L 的范围内线性良好,其检出限为0. 0010 滋g / g。 以 0. 8, 4. 0 和 40 滋g / L 分别为低、中、高浓度考察 4 种植物激素的回收率为 76. 1% ~ 93. 5% ,RSD 为 0. 8% ~ 6. 0% 。 结果表明,籽粒中含有的 ABA 浓度明显高于其它部位。本研究为快速准确地分离和测定大豆不同部位内源激素提供了有效方法。
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