一、样品提取
准确称取牛奶 / 猪肉试样 5.00 g(精确至 0.01)于 50 mL 离 心管中,加入 10 mL EDTA-Mellvaine 缓冲液,涡旋 1 min,超 声提取 10 min,再于 4000 r/min 下离心 5 min,取上清液, 按上述步骤再提取两次,离心,合并三次上清液,用 EDTAMellvaine 缓冲液定容至 30 mL 备用。
二、SPE 柱净化(Copure® HLB,200 mg/6 mL)
活化:净化前固相萃取柱依次使用 6 mL 甲醇活化、6 mL 水 平衡。
上样和洗脱:取 10 mL 上清液上样,弃去流出液,加 2 mL 5% 甲醇水溶液淋洗,弃去淋洗液,将小柱抽干,再用 6 mL 甲醇 洗脱并收集洗脱液。
重新溶解:洗脱液于 50℃下氮吹至近干,加 1 mL 甲醇重新溶解,涡旋混匀,过 0.22 µm 有机滤膜,待上机测试。
三、仪器条件
设备:Waters Alliance 2695 色谱柱:InerSustain®-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 检测器:Waters 2487 紫外检测器 检测波长:254 nm 流动相:A:乙腈 B:0.1% 甲酸水溶液 洗脱方式:梯度洗脱,见表 1
表 1 流动相梯度洗脱
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