一、样品提取
准确移取样品 1.0 mL 血清样品,备用。
二、SPE 柱净化(Copure® HLB,60 mg/3 mL)
活化:HLB 固相萃取柱使用前用 1 mL 甲醇、1 mL 水活化。
上样和洗脱:在 HLB 固相萃取柱上加入 1 mL 血清样品,弃去 流出液;用 1 mL 5%甲醇水溶液、淋洗,弃去淋洗液;抽干小柱; 用 2 mL 甲醇溶液洗脱,收集洗脱液(整个上样、洗脱过程保 持流速 1mL/min)。
重新溶解:50℃缓慢氮气流条件下吹至近干,用 1 mL 甲醇 复溶。经 0.22 µm 滤膜重新过滤,供高效液相色谱测定。
三、仪器条件 设 备:Waters Alliance 2695 色谱柱 :XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 检测器 :Waters 2475 荧光检测器 检测波长:激发波长:206 nm 发射波长:226 nm 流动相:A:乙腈 B:0.1% 甲酸水 洗脱方式:梯度洗脱,见表 1
表 1 流动相梯度洗脱条件
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