本生阐述：Elisa试剂盒的温育如何进行？

　　本生阐述：Elisa试剂盒的温育如何进行？
 

　　Elisa试剂盒的操作因固相载体的形成不同而有所差异，良好的仪器和正确的操作是ELISA检测结果准确可靠的必要条件。国内医学检验一般均用板式点。

　　Elisa试剂盒的操作步骤：

　　方法一：用于检测未知抗原的双抗体夹心法:

　　1. 包被：用0.05M  PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。

　　2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

　　3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

　　4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

　　5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6.   结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：小鼠ELISA试剂盒反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或较浅，依据所呈颜色的深浅，以“+"、“-"号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

　　18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。

　　方法二：用于检测未知抗体的间接法：

　　用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,zui后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法"的4、5、6。

　　其中还有一个步骤特别需要注意那就是洗涤：

　　洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。

　　ELISA试剂盒本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

　　本生阐述：小鼠γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒

　　一、实验原理：

　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠γ干扰素(IFN-γ)水平。用纯化的小鼠γ 干扰素(IFN-γ)捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入小鼠γ干 扰素(IFN-γ)，再与 HRP 标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠γ干扰素(IFN-γ)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，通过标准曲线计算样品中小鼠γ干扰素(IFN-γ)含量。

　　二、注意事项：

　　1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　4. 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔孔的 OD 值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定，计算时请乘以总稀释倍数(×n×5)。

　　5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6. 底物请避光保存。

　　7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

　　8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9. 本试剂不同批号组分不得混用。

　　三、操作程序

　　四、小鼠γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒产品说明

　　规格：96T、48T

　　小鼠γ干扰素试剂盒性能：

　　1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.95 以上。 2.批内变异系数与批间变异系数应分别小于 10%和 10% 。

　　检测范围： 25 pg/mL - 800 pg/mL

　　灵敏度：小低检测浓度小于 1.0 pg/mL

　　保存条件及有效期： 1.试剂盒保存： 2-8℃。 2.有效期： 6 个月

　　小鼠γ干扰素试剂盒本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

　　本生资讯| ELISA试剂盒的真伪如何鉴别?

　　在国内生物研究蓬勃发展的现在，假冒无视科学研究的严谨性和严肃性，让广大的科研工作者被动造假，严重破坏了科研氛围，扰乱了市场秩序，联科生物整理了一些鉴别这些假冒伪劣ELISA试剂盒的方法，供广大的科研工作者和用户参考，让希望对广大科研工作者有所帮助。

　　购买前

　　【方法一】向厂家索要或从其网站下载说明书，查找ELISA的性能指标：准确度(加标回收率、稀释线性)、精密度(板内差、板间差)、灵敏度、样本值、特异性、校准。一般来说，除了校准不一定每份说明书都有外，其余的指标一般都需要罗列(部分样本需要高倍稀释的，可能没有准确度这个指标)。如果无法提供这些性能指标，则说明该试剂盒可能是假货，或者试剂盒开发过程不够科学严谨，有可能无法检测出真实的样本值。

　　【方法二】对于夸大ELISA涵盖的指标的范围，尤其是不常见的种属，可先去ELISA试剂盒网站上搜索，如果搜索不到该种属的ELISA试剂盒，则有可能是假货，需要小心谨慎。

　　【方法三】将“厂家名”、“ELISA”和“假货”等关键词在网上搜索，有的网站或论坛都会有打假曝光台。

　　购买后

　　【方法一】检查说明书、包装盒的质量，通常假冒伪劣产品为了降低成本，印刷的质量会比较差。其次仔细阅读说明书，如上所示查找ELISA的性能指标。

　　【方法二】

　　Ⅰ.利用干扰实验即可鉴别ELISA试剂盒是否检测目的抗原，方法如下：

　　(1)将针对试剂盒特异性的重组蛋白抗原和试剂盒中的检测抗体配置成antibody:antigen=1:2的混合孵育液

　　(2)37℃孵育15分钟后，代替原试剂盒中的检测抗体

　　(3)后续操作按照试剂盒说明书进行，加检测抗体、酶复合物和底物

　　(4)实验完毕后，检测其标准曲线，如果标准曲线良好则说明加入的目的抗原和试剂盒抗体不匹配，试剂盒检测抗体针对的是非目的抗原，该试剂盒为伪劣假造ELISA试剂盒。

　　(5)如果标准曲线无线性，则说明试剂盒检测抗体已被目的抗原中和或干扰，影响了其实际试剂盒抗体的检测作用，则该试剂盒检测抗体针对的是目的抗原。

　　Ⅱ.如果购买了两盒同一公司的ELISA试剂盒A和B，利用交叉实验即可鉴别ELISA试剂盒是否造假，方法如下：

　　(1)取出购买的试剂盒A的包被板两条。

　　(2)一条包被板加试剂盒A的标准品做标准曲线。

　　(3)另一条包被板加试剂盒B的标准品做标准曲线。

　　(4)后续操作按照试剂盒说明书进行，加检测抗体、酶复合物和底物。

　　(5)实验完毕后，检测两条标准曲线，如果两条标准曲线一致则说明两个ELISA试剂盒检测的同一个指标而非A和B，即该试剂盒为伪劣假造ELISA试剂盒。

　　(6)如果两条标准曲线不一致则说明两个ELISA试剂盒检测的不同指标，试剂盒A只能检测A，不能检测B，即该试剂盒为正常的ELISA试剂盒。

　　ELISA 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

　　本生阐述：elisa操作步骤说明及注意事项

　　酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay(简写ELISA)，指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。要知道elisa操作步骤首先我们先了解一下elisa的原理是什么。

　　elisa的原理：

　　①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。

　　②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性， 又保留酶的活性。在测定时，把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体 上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物， 产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据焰色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到 很高的敏感度。

　　elisa操作步骤：

　　方法一　用于检测未知抗原的双抗体夹心法:

　　1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。

　　2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

　　3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

　　4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

　　5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越 强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则 410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

　　方法二　用于检测未知抗体的间接法：

　　用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日 洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔 中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体

　　以上是elisa操作步骤，那么在elisa操作步骤的操作步骤中需要注意什么呢?下面是elisa实验的注意事项：

　　1.正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。

　　2.在elisa操作步骤中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括：固相载体的选择、包被抗体(或抗原)的选择、酶标记抗体工作浓度的选择、酶的底物及供氢体的选择

　　elisa试剂盒 本生(天津)健康科技有限公司是一家从事健康科技技术开发销售的公司，本生生物公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准。本生(天津)健康科技有限公司由具有行业背景和丰富市场经验的业人士组成，于为生命科学研究域提供产品，为广大科研工作者提供服务。 既能满足研发类客户对产品种类、包装的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。

　　本生—ELISA试剂盒检测注意事项汇总

　　以下是本生技术小编总结：影响ELISA检测的关键因素，也是众多ELISA 用户在实验中经常遇到的问题及解决方案：

　　Q1：为什么所有试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作?

　　A1：温度是ELISA结合反应的重要影响因素。为了使所有样本在一致的温度下反应，实验前务必将所有试剂平衡至室温，包括检测样本。避免因温度的动力学反应差异而导致ELISA检测结果的不准确。

　　Q2：为什么标准曲线线性较差?

　　A2：按照推荐方式保存标准品;溶解标准品之前需短暂离心，彻底收集粉末;确保标准品完全溶解和混匀(大约10min)，然后再进行后续的系列稀释步骤，确保每一步都充分混匀且精确移液;显色的恰当终止;选择合适的数学拟合方程绘制标准曲线。

　　Q3：ELISA实验为什么必须设置复孔?

　　A3：为获得更准确的实验结果，强烈建议标准品及样本进行复孔检测。

　　因为复孔检测可以：

　　★计算平均值，确保实验结果更准确;

　　★解决实验中误操作造成的跳孔现象;

　　★计算CV值，对实验的操作和试剂盒的精密度进行评估。

　　Q4：为什么实验过程中孵育、洗涤需要振荡?如何振荡?

　　A4：振荡孵育使反应更充分，振荡洗涤使背景更干净。建议使用酶标专用96孔微孔板振荡器。

　　孵育过程振荡，可以加快、加强抗原抗体间的相互碰撞接触，使得反应过程更加完全，OD值通常会比未振荡孵育的结果要高;洗涤过程振荡，可以使洗板更干净，在很大程度上能降低背景值，同时可以提高试剂盒检测的灵敏度。

　　具体操作请参见说明书或致电劲马生物

　　Q5：何时终止ELISA反应?

　　A5：ELISA实验最终需要酶催化底物显色反应来完成，在最合适的时间终止反应是ELISA实验成功的重要因素。在HRP-TMB酶反应系统中，当最高浓度标准品颜色不再变深，倒数2-3个浓度标准品颜色开始有浅蓝色时，便需要终止反应;或者也可以根据最高浓度标准品孔在620nm的OD值来决定，OD620=0.9-0.95之间时即可终止。

　　Q6：为什么酶标仪读数时必须选用双波长?

　　A6：首先，酶标仪使用前务必预热10-15min，使测读结果更稳定。其次，ELISA实验采用双波长测定吸光度，可以排除单波长检测时的测定干扰(标本的浓度，干扰色等)。一般采用波长作为参照波长，在参照波长下，检测物的吸光值最小，检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收;因此，双波长测定，可最大限度的消除指纹、杂质及不透光的物质对酶标仪读数带来的误差，以保证实验数据的准确度。

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　　本生生物ELISA试剂盒促销通知!

　　ELISA试剂盒检测种属：人、大小鼠、豚鼠、兔子、猪、犬、牛羊、鸡鸭、猴ELISA试剂盒等种属，天津本生生物供应。

       促销时间：

     11.22—12.22 时间有限，数量有限

       48T/96T——700/950

　　应用范围：可用于科研实验。

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　　本生教您如何选择ELISA试剂盒的正确步骤

　　ELISA试剂盒以灵敏度较高、特异性较好的特点在上得到了广泛的应用，然而实验新手们面对各种各样、动则上上千种的ELISA试剂盒，内心应该是崩溃的。

　　各种厂家、品牌，各种种属，各种因子，琳琅满目，质量良莠不齐，如何浪里淘金，选择既符合研究需求，又品质上乘的 ELISA 试剂盒呢?

　　本生技术小编教你几招，一眼“相中”、最合适的那个ELISA试剂盒!

　　首先，你要明确研究种属：

　　一般来说，厂家都会在产品名称上标明种属，且为单词，检索种属的常用语言为英文。

　　如果您需对不同物种的同一因子进行定量，建议优先寻找适用于多个种属的 ELISA 试剂盒，产品介绍中会注明

　　其次，要明确样本类型：

　　不同厂家验证样本类型不同，即使同一厂家不同试剂盒，其验证样本类型也不尽相同。特别是复杂的血浆样本，根据样本处理方式的差异，分为 EDTA 血浆、肝素抗凝血浆和柠檬酸盐血浆，因此购买前需仔细核对。

　　第三步：要会预测自己的目标因子的浓度

　　一般来说，待测因子可以根据经验或资料获得参考的检测范围，且正常人与疾病状态存在差异。如热门炎症因子 IL-6，正常人血清中浓度为 3.13 pg/mL，病人会显著，CAR-T 回输病人血清中的 IL-6 浓度甚至为正常人的 200 倍以上。

　　因而，必要时进行样本的稀释及选择合适检测范围的试剂盒极其重要。

　　若浓度太低，可选择高敏试剂盒;若不确定待测浓度或样本间浓度差异较大，建议使用检测动态范围更宽的化学发光法ELISA试剂盒。

　　如同样为 IL-6 ELISA 试剂盒，各类型检测范围差异较大，需要根据实际情况选择合适的试剂盒。

　　第四步：检查试剂盒进行过哪些质控

　　质控数据在说明书中即可找到，在购买前检查试剂盒是否进行过严格的质控实验，包括批次内(Intra-Assay)及批次间(Inter-Assay)、掺入回收实验、线性稀释实验及交叉反应测试等，每个数据都看一下，确保的结果重现性及准确性。

　　第五步：确定需检测的因子数量

　　如果待测因子超过 5 个，且样本量较小时，单因子 ELISA 检测方法并不是选择。

　　建议考虑多因子检测方法，如固相芯片(样本数量一般 5 个以内，检测指标可达上百个)及 Luminex 液相芯片方法 (检测样本多达 80 个，检测指标多达 50 个)或微流控 ELISA 检测系统 Ella。

　　可节约样本及时间成本，也可保证检测结果准确。

　　第六步：预算评估

　　预算往往是大家优先考虑的，实际上，不能够一味讲究产品价格，更需要考虑性价比。生物学是极其严谨的科学，一致性的实验结果是基金、文章等评审过程中的因素，即使低廉的价格，不能够重现结果，也是资源的另一种浪费。

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　　本生分享ELISA试剂盒质保的七要素
 

　　ELISA试剂盒质量是一个复杂的过程，许多重要的环节都影响到检测的质量。天津本生技术小编分享影响ELISA试剂盒质保的七要素。

　　一、方法学的影响

　　ELISA测定模式包括以下几种：双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、IgM抗体捕捉法、竞争抑制法，其中竞争抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作时差所引起竞争等因素的影响，结果重复性较差，质量较难控制。

　　第二、试剂因素

　　不同批次的ELISA试剂在制作过程中很难质量一致，即使是通过批批检的项目其检测结果也存在差异，因此必须选择和订购长批号的试剂，并保存条件。严格执行这一标准可以避免因试剂批号改变而重新建立质控体系及重新评估试剂的复杂过程，并且能够结果的稳定性;对于效期短、使用率低的试剂，应当小量分装，每次使用则取分装部分即可，避免反复冻融造成试剂的失效。

　　第三、样本因素

　　标本干扰因素包括内源性干扰因素和外源性干扰因素，者包括类风湿因子、补体、异嗜性抗体、自身抗体等，后者包括标本溶血、标本被污染、标本贮存时间过长、标本凝固不全、冷冻标本的反复冻融等。

　　第四、操作因素

　　ELISA操作步骤复杂，操作不当将引起较大的误差。加样、温育、洗涤、显色、比色。

　　第五、灰区的设置

　　通常情况下，ELISA定性实验以“阳性"和“阴性"来报告结果，两者间有一条分界线被称为“阳性判断值"(cut-off  value，CO值)，这是定性免疫测定结果报告的依据。

　　第六、标本复查

　　ELISA手工检测过程复杂，影响因素较多，即使室内质控在控，也可能因孔间差异而造成结果的差异，因此加大复查力度是结果准确性的可靠方法，比如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的可疑、弱阳性标本及少见模式的检测结果进行复查。

　　第七、常表示结果的常用方法

　　1.定性测定

　　2.半定量测定 结果一般以滴度表示。

　　3.定量测定  即用已知量的标准品作一系列稀释后进行ELISA测定，绘制标准曲线，结果以jue对量或单位表示。在ELISA定量检测中每一块反应板都必须绘制相应的标准曲线。

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　【BUNSEN本生】关于ELISA试剂盒如何保温，你知道多少?

　　在ELISA试剂盒中一般有两次抗原抗体反响，即加标本和加酶结合物后，抗原抗体反响的完结需求有一定的温度和时刻，这一保温进程称为温育，有人称之为孵育，在ELISA试剂盒中似不恰当。

　　1. 为什么ELISA反响总是需求一定时刻的温育?

　　ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生，以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其间的抗原并不是都有平等的和固相抗结合的时机，只有贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触，这是一个逐步平衡的进程，因而需经扩散才能到达反响的结尾。在这以后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。

　　2. 温育常选用的温度有43℃、37℃、室温和4℃等。

　　37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的适宜温度，在建立ELISA方法作反响动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反响一般在37℃经1～2小时，产品的生成可达高峰。为加快反响，可进步反响的温度，有些实验在43℃进行，但不宜选用更高的温度。抗原抗体反响4℃更为，在放射免疫测定中多使反响在冰箱中过夜，以构成多的沉淀。但因所需时刻太长，在ELISA试剂盒中一般不予选用。

　　ELISA试剂盒保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均选用水浴，可将ELISA试剂盒板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度敏捷平衡。为防止蒸腾，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反响板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA试剂盒应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的资料如金属等，在盒底垫湿的纱布，后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规则的温度，特别是在气温较低的时候更应如此。

　　无论是水浴仍是湿盒温育，反响板均不宜叠放，以确保各板的温度都能敏捷平衡。室温温育的反响，操作时的室温应严厉限制在规则的范围内，规范室温温度是指20～25℃，但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时，ELISA试剂盒只需平置于操作台上即可。应留意温育的温度和时刻应按规则力求准确。为确保这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板一起测定。

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　　根据elisa试剂盒原理如何做实验设计，本生解答!

　　elisa试剂盒原理在实验设计的过程中尽量排除各种混杂干扰因素，使结果的判定更为科学、准确，也是课题实验设计过程需要考量的之重。

　　如何根据elisa试剂盒原理做实验设计?下面是本生技术小编为大家整理的分析内容：

　　测量时，抗原先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体与酶结合成的偶联物，此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。

　　elisa试剂盒原理其所生成的颜色深浅与欲测的抗原含量成正比。这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计加以测定。其方法简单，方便讯速，特异性强。

　　实验设计是多快好省地进行科学研究的重要基础，因此，要求我们实验的方案能够准确、快速、成本低，但是又不能*照搬参考资料，

　　zui重要的是，能够在原有实验方法的基础上，进行大胆的科学合理创新，充分利用“已知"条件，合理预判“未知"结果。从而提炼出elisa试剂盒实验设计思路，寻找到合适且的实验方法。

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　　本生快讯——什么影响了ELISA试剂盒质保
 

　　ELISA试剂盒为什么蜕变?是什么影响了ELISA试剂盒质保?一旦蜕变会有什么影响呢?

　　1.办法学的影响

　　ELISA测定形式包含以下几种：双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、IgM抗体捕捉法、竞争抑制法，其间竞争抑制法(HBeAb,HBcAb等选用)因受操作时差所引起的竞争等要素的影响，成果重复性较差，质量较难操控。

　　2.试剂要素

　　不同批次的ELISA试剂在制作进程中很难质量*一致，即使是通过批批检的项目其检测成果也存在差异，因而必须挑选和订购长批号的试剂，并保存条件。严格执行这一规范可以防止因试剂批号改动而从头建立质控体系及从头评估试剂的杂乱进程，并且能够成果的稳定性;关于效期短、使用率低的试剂，应当小量分装，每次使用则取分装部分即可，防止重复冻融造成试剂的失效。

　　3.样本要素

　　标本搅扰要素包含内源性搅扰要素和外源性搅扰要素，者包含类风湿因子、补体、异嗜性抗体、本身抗体、溶菌酶等，后者包含标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时刻过长、标本凝结不全、冷冻标本的重复冻融等。

　　4.操作要素

　　ELISA操作步骤杂乱，操作不当将引起较大的差错。加样、温育、洗刷、显色、比色。

　　5.灰区的设置

　　通常情况下，ELISA定性试验以“阳性”和“阴性”来报告成果，两者间有一条分界线被称为“阳性判别值”(cut-off  value，CO值)，这是定性免疫测定成果报告的根据。

　　6.标本复查

　　ELISA手工检测进程杂乱，影响要素较多，即使室内质控在控，也或许因孔间差异而造成成果的差异，因而加大复查力度是成果准确性的牢靠办法，比如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的可疑、弱阳性标本及罕见形式的检测成果进行复查。

　　7.常表明成果的常用办法

　　a.定性测定

　　b.半定量测定 成果一般以滴度表明。

　　c.定量测定  即用已知量的规范品作一系列稀释后进行ELISA测定，制作规范曲线，成果以肯定量或单位表明。在ELISA定量检测中每一块反应板都必须制作相应的规范曲线。

　　ELISA试剂盒   本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

本生生物新产品ELISA试剂盒订购开始啦！

本生生物供应产品全：ELISA试剂盒，PCR试剂，荧光定量PCR耗材，离心管，进口吸头，动物血清，冻存管，培养瓶等等；
现ELISA试剂盒具体详情如下：

规格：48T/96T

本生生物公司供应：分光光度计，ELISA试剂盒，荧光定量PCR耗材，移液器吸嘴，微量离心管，进口冻存管，细胞培养皿，培养板，培养瓶，吸头，仪器及手套，色谱耗材，针头过滤器。

　　天津本生将您怎样选购ELISA试剂盒?

　　今天天津本生小编给大家科普一下怎样选购适合ELISA试剂盒。目前市场上的ELISA试剂盒质量参差不齐，如何去挑选适合自己的试剂盒就显得特别重要，具体有以下几点可供参考：

　　一、特异性

　　ELISA试剂盒的特异性与试剂盒的关键组分，抗体对有关，若抗体对中之一为多抗，另一个必须为单抗，建议使用双单抗。

　　二、灵敏度

　　灵敏度反映的是试剂盒检出被检物质的能力，用户可根据自己样本中待检指标的量选择合适的试剂盒，如果待检指标量很低，一般的试剂盒不能满足要求，可选择高敏的ELISA试剂盒。

　　三、重复性

　　科学实验讲求重复性，一般ELISA试剂盒，其板内和板间变异系数应该控制在15%以内。

　　四、简便性

　　试剂盒在保证高质量数据的情况下，实验时间越短，操作越便利，越容易受到用户欢迎!这也不妨作为选择试剂盒的一个指标。

　　五、经济性

　　进口分装试剂盒因为省去不少物流和报关费用，与国外进口试剂相比价格上有比较大的优惠，而且能提供比较灵活的包装规格，特别是48T等小包装，目前很多客户因为对品牌的信任度问题，主要还是选择国外进口，但是国内进口分装比较成熟的公司仍然是一个非常好的选择。

　　本生生物公司供应：ELISA试剂盒,动物血清,荧光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量离心管,进口冻存管,细胞培养皿,培养板,培养瓶,进口吸头,仪器及手套,色谱耗材,针头过滤器等。

　　本生详解：ELISA试剂盒定性和定量的测定

　　ELISA试剂盒定性测定：

　　定性测定的效果判别是对受检标本中是不是含有待测抗原或抗体作出“有"或“无"的简略答复，分别用“阳性"、“阴性"标明。“阳性"标明该标本在该测定体系中有反应。“阴性"则为无反应。用定性判别法也可得到半定量效果，即用滴度来标明反应的强度，其实质仍是一个定性试验。

　　ELISA试剂盒在这种半定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的zui高稀释度即为滴度。根据滴度的凹凸，可以判别标本反应性的强弱，这比查询不稀释标本呈色的深浅判别为强阳性、弱阳性更具定量意义。

　　ELISA试剂盒定量测定：

　　ELISA操作过程凌乱，影响反应要素较多，特别是固相载体的包被难抵达各个别之间的一起，因此在定量测定中，每批检验均须用一系列不相同浓度的参看标准品在相同的条件下制作标准曲线。

　　ELISA试剂盒测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的规模一般较宽，曲线zui高点的吸光度可接近2.0，绘制时常用半对数纸，以查看物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点联接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平整，中心较呈直线的有些是的查看区域。

　　ELISA试剂盒   本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

　　BUNSEN本生Elisa试剂盒实验的技巧及注意事项

　　在操作elisa试剂盒实验前，不少老师会找寻很多的相关实验资料，网上的资料一大堆，然而真正所能够需要用到的技巧和注意也就那几条，熟练的了解并掌握之后再应用到实验中就会简单的多。

　　一、加样的经验总结

　　加样或加试剂时，请注意在吸取标本/标准品，酶结合物或底物时，个孔与一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间控制 在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。

　　二、孵育的三条必知

　　1.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标 板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发;

　　2.洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;

　　3.同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。

　　三、ELISA洗涤小技巧

　　洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直 接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响*后的酶标仪读数。

　　四、反应时间的控制

　　加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔 10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。

　　五、操作说明

　　1.封板膜只做一次性使用。

　　2.标本中待测物质含量过高时先将样本稀释一定倍数后再测定，计算时请乘以稀释倍数。

　　3.各步加样均使用加样器，并经常校对其正确性，一次加样时间控制在5分钟内(标本数目多的时候，上海研域推荐使用排枪加样)。

　　4.液体标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月;标本溶血会影响检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

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　　本生解析elisa试剂盒质控分析及方法原理

　　应客户们对年前产品预购的要求，今日开始逐渐安排发货，具体内容公司业务员会及时联xi。新年的开始中，本生公司技术专员为elisa试剂盒新手入门的使用技术报告做出一番整理，在这里分享给您，供参考。

　　◎ ELISA方法原理

　　1. 双抗体(原)夹心法：检测抗原(体)的常见方法，应用针对抗原两个不同决定族的两种单抗分别作为固相载体和酶标抗体检测溶液中的抗原(适用于二价以上抗原，不能测 小分子半抗原)。

　　2. 间接法：检测抗体的方法，利用酶标记的抗抗体(第二抗体)检测已与固相抗原结合的抗体。

　　3. 竞争法：检测抗原或小分子半抗原、抗体，以测抗原为例，使待测抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，结果如待测抗原含量越多，与固相抗体结合的酶标抗原就越少，显色越浅，二者呈负相关。

　　◎ elisa试剂盒操作注意

　　① 使用干净的塑料容器配置洗涤液，使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

　　② 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

　　③ 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

　　◎ elisa试剂盒质控分析

　　1. 人员培训内容包括：

　　①检验项目的基本原理(ELISA试剂盒原理);

　　②熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点;熟悉检测试剂性能(包括试剂盒组成，包被片段及其组成);③熟悉检测仪器的原理及性能;掌握数据处理的能力和质量控制知识;

　　④某些特殊项目的检测如抗HIV等需经有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。

　　2. 基本了解

　　① 1971年Engvall等人把免疫组化的EIA技术应用于临床检验发展为ELISA试剂盒技术。

　　② 特点：ELISA试剂盒在固相表面组装免疫活性物质形成"免疫吸附剂"。

　　③ 酶标记免疫活性物质，进行信号放大;

　　④ 有二步温育反应二次洗涤过程;

　　⑤ 灵敏度特异性相对较高。

　　⑥ 局限性：只能检测到ng水平

　　⑦ 精密度差(批内CV15-20%);

　　⑧ ELISA检测试剂盒线性范围窄(一个数量级);

　　⑨ 存在"HD-HOOK"效应。

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　　英文名称：Human HO ELISA Kit

　　实验类型：夹心法

　　检测范围：31.25 ng/ml - 1000 ng/ml

　　测限：1 ng/ml

　　应用范围：血清、血浆、组织匀浆、细胞培养物上清或其它相关液体(本产品仅供实验室科研及非临床用途)

　　人血红素加氧酶(HO)ELISA试剂盒仅供研究使用

　　人血红素加氧酶(HO)ELISA试剂盒实验目的

　　本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人血红素加氧酶(HO)的含量。

　　有效期：6个月

　　保存条件：2-8℃

　　实验原理

　　试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人血红素加氧酶(HO)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成ZZ的黄色。颜色的深浅和样品中的人血红素加氧酶(HO)呈正相关。用酶标仪在450nm  波长下测定吸光度(OD 值)，计算样品浓度。

　　人血红素加氧酶(HO)ELISA试剂盒组成

　　试剂盒组成96孔配置48孔配置备注

　　微孔酶标板8孔×12条8孔×6条 无

　　标准品0.3mL×6管0.3mL×6管无

　　样本稀释液6mL3mL无

　　检测抗体-HRP10mL5mL无

　　20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释

　　底物A6mL3mL无

　　底物B6mL3mL无

　　终止液6mL3mL无

　　封板膜2张2张无

　　说明书1份1份无

　　自封袋1个1个无

　　备注：

　　1. 标准品浓度依次为：1000、500、250、125、62.5、0 ng/ml

　　2.  经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。

　　样本处理及要求

　　1.  血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

　　2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C  1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

　　3. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

　　注：标本溶血会影响检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

　　需要而未提供的试剂和器材

　　1. 酶标仪(450nm)

　　2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

　　3. 37℃恒温箱

　　4. 蒸馏水或去离子水

　　试剂准备

　　试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

　　20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

　　操作步骤

　　1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

　　2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

　　3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。

　　4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

　　5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(350μL)，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

　　6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

　　7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

　　人血红素加氧酶(HO)ELISA试剂盒注意事项

　　1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

　　2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

　　3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

　　4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

　　5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

　　6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

　　7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

　　8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

　　9. 不能使用过期产品。

　　10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。

　　洗板方法

　　手工洗板方法：吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次;将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。根据需要，重复此过程数次。

　　自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

　　实验结果计算

　　以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

　　(此图仅供参考)

　　人血红素加氧酶(HO)ELISA试剂盒性能

　　1. 检测范围：31.25 ng/ml - 1000 ng/ml

　　2. 灵敏度：检测浓度小于1 ng/ml

　　3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

　　4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

　　本生教你正确操作小鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒

　　小鼠免疫球蛋白试剂盒检测原理:

　　小鼠免疫球蛋白试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被对称性免疫球蛋白A(IgA)抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成ZZ的黄色。颜色的深浅和样品中的对称性免疫球蛋白A(IgA)试剂盒呈正相关。用酶标仪在450nm   波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。

　　小鼠免疫球蛋白试剂盒样品收集、处理及保存方法:

　　1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

　　2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

　　3、组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟。

　　4、取上清液保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。

　　注：标本溶血会影响检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

　　小鼠免疫球蛋白试剂盒操作:

　　小鼠免疫球蛋白试剂盒使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

　　标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。在450nm波长处测定各孔的OD值。局限6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到的结果。

　　小鼠免疫球蛋白试剂盒：

　　1、灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为1.0 nmol/L。

　　2、特异性：不与其它细胞因子反应。

　　3、重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

　　本生教你正确操作小鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒,本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。