本生阐述：elisa操作步骤说明及注意事项

　　本生阐述：elisa操作步骤说明及注意事项

　　酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay(简写ELISA)，指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。要知道elisa操作步骤首先我们先了解一下elisa的原理是什么。

　　elisa的原理：

　　①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。

　　②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性， 又保留酶的活性。在测定时，把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体 上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物， 产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据焰色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到 很高的敏感度。

　　elisa操作步骤：

　　方法一　用于检测未知抗原的双抗体夹心法:

　　1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。

　　2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

　　3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

　　4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

　　5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越 强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则 410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

　　方法二　用于检测未知抗体的间接法：

　　用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日 洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔 中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体

　　以上是elisa操作步骤，那么在elisa操作步骤的操作步骤中需要注意什么呢?下面是elisa实验的注意事项：

　　1.正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。

　　2.在elisa操作步骤中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括：固相载体的选择、包被抗体(或抗原)的选择、酶标记抗体工作浓度的选择、酶的底物及供氢体的选择

　　elisa试剂盒 本生(天津)健康科技有限公司是一家从事健康科技技术开发销售的公司，本生生物公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准。本生(天津)健康科技有限公司由具有行业背景和丰富市场经验的业人士组成，于为生命科学研究域提供产品，为广大科研工作者提供服务。 既能满足研发类客户对产品种类、包装的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。

　　本生阐述：离心管的选择及注意事项!

　　离心技术主要用于各种生物样品的分离和制备，生物样品悬浮液盛放在离心管中在高速旋转下，由于巨大的离心力作用，使悬浮的微小颗粒(如细胞器、生物大分子的沉淀等) 以一定的速度沉降，从而与溶液得以分离。而离心管就是离心试验中的实验耗材之一，以下便是本生生物小编的一些详解，不妨来看看：

　　离心管的分类：

　　1、塑料离心管

　　塑料离心管的优点是透明或者是半透明的，它的硬度小，可用穿刺法取出梯度。缺点是易变形，抗有机溶剂腐蚀性差，使用寿命短。塑料离心管都有管盖，它的作用是防止样品外泄，尤其是用于有放射性或强腐蚀性的样品时防止样品外泄是很重要的一点;管盖还有一个作用是防止样品挥发以及支持离心管，防止离心管变形。在挑选这一点的时候还要注意检查管盖是否严密，在试验时能否盖严，以到达倒置不漏液;我们都知道在塑料离心管中，常用材料有聚乙烯PE)，聚碳酸酯(PC)，聚丙烯(PP)等，其中聚丙烯PP管性能会相对较好，所以，我们在挑选塑料离心管时尽可能的考虑聚丙烯的塑料离心管。

　　2、玻璃离心管

　　使用玻璃管时离心力不宜过大，需要垫橡胶垫，防止管子破碎，高速离心机一般不选用玻璃管。离心管盖子封闭性不够好，液体就不能加满(针对告诉离心机且使用角转子)以防外溢，失去平衡。外溢后果是污染转子和离心腔，影响感应器正常工作。超速离心时，液体一定要加满离心管，因为超离需要抽高真空，只有加满才能避免离心管变形。

　　3、钢制离心管

　　而钢制离心管强度大，不变形，能抗热，抗冻，抗化学腐蚀，它的应用也是相当广泛但使用时同样也应避免接触强腐蚀性的化学药品，如强酸、强碱等。尽量避免这些化学物质的腐蚀。

　　超滤离心管使用方法和注意事项：

　　1、选择合适的超滤离心管，主要考虑MWCO和浓缩体积，通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤离心管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤离心管。

　　2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤离心管需要插在冰上预冷。

　　3、质量和ZX二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。不同离心机的转速rpm换算成g之后，有所不同。离心机的加速度调至档，减小对膜的压力。注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开离心机，否则离心机出问题时，无法时间处理，后果不可预测!

　　离心管的选择及注意事项!先和大家介绍到这，如果想要了解更多离心管的信息，可以关注天津本生生物，本生给生物医药客户提供生物实验室检测试剂及耗材，欢迎广大客户来询。

　　本生阐述：小鼠γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒

　　一、实验原理：

　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠γ干扰素(IFN-γ)水平。用纯化的小鼠γ 干扰素(IFN-γ)捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入小鼠γ干 扰素(IFN-γ)，再与 HRP 标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠γ干扰素(IFN-γ)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，通过标准曲线计算样品中小鼠γ干扰素(IFN-γ)含量。

　　二、注意事项：

　　1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　4. 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔孔的 OD 值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定，计算时请乘以总稀释倍数(×n×5)。

　　5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6. 底物请避光保存。

　　7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

　　8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9. 本试剂不同批号组分不得混用。

　　三、操作程序

　　四、小鼠γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒产品说明

　　规格：96T、48T

　　小鼠γ干扰素试剂盒性能：

　　1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.95 以上。 2.批内变异系数与批间变异系数应分别小于 10%和 10% 。

　　检测范围： 25 pg/mL - 800 pg/mL

　　灵敏度：小低检测浓度小于 1.0 pg/mL

　　保存条件及有效期： 1.试剂盒保存： 2-8℃。 2.有效期： 6 个月

　　小鼠γ干扰素试剂盒本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

　　大鼠Elisa试剂盒操作注意事项与步骤

　　大鼠Elisa试剂盒注意事项:

　　1. 大鼠Elisa试剂盒冻结与寄存：-20℃取出后主张放入2～8℃冰箱中冻结约，每隔一段时间悄悄摇晃均匀，不可直接放入温度较高处冻结，防止因温度改变太大，形成蛋白质凝聚而出现沉积，血清的质量下降。若短期无法用完一瓶，主张无菌分装,再放回冷冻，防止反复冻融。4℃长时间保存后血清中的变性脂蛋白及纤维蛋白，形成絮状物质变差。

　　2. 大鼠Elisa试剂盒是否灭活：加热可灭huoxue清中补体系统，在极少数情况下(培育ES细胞，滑润肌细胞时)主张灭活，在培育其余细胞时不主张灭huoxue清。血清灭活十分简单产生沉积，如必须灭活请按56℃，30 min，轻微摇晃准则操作，灭活温度高、时间长、摇晃不均都简单产生沉积。

　　3. 大鼠Elisa试剂盒培育基：无血清培育基在结果重复性、细胞体外分化方面有优势，可是，血清仍然是培育液中最根本的添加物，尤其是在原代培育或细胞成长状况不良时，常常会先使用有血清的培育液进行培育，待细胞成长旺盛后再换成无血清培育液。

　　大鼠Elisa试剂盒操作过程 ：

　　1.用盖片镊人Elisa试剂盒将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭洁净，不要用纱布;

　　2.将盖玻片悄悄放入6孔培育板(每孔一片)或培育皿中(每个平皿可放置2-3片);

　　3.在间隔紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;

　　4.将通过计数的细胞悬浮液移入培育板中，使盖玻片彻底浸在培育液中;

　　5.将人Elisa试剂盒培育板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞成长至覆盖培育板底部2/3面积时，将培育板取出，用盖片镊悄悄取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

　　大鼠Elisa试剂盒操作注意事项与步骤先和大家介绍到这，如果想要了解更多Elisa试剂盒的信息，可以关注天津本生，本生给生物医药客户提供生物实验室检测试剂及耗材，欢迎广大客户来询。

　　BUNSEN本生Elisa试剂盒实验的技巧及注意事项

　　在操作elisa试剂盒实验前，不少老师会找寻很多的相关实验资料，网上的资料一大堆，然而真正所能够需要用到的技巧和注意也就那几条，熟练的了解并掌握之后再应用到实验中就会简单的多。

　　一、加样的经验总结

　　加样或加试剂时，请注意在吸取标本/标准品，酶结合物或底物时，个孔与一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间控制 在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。

　　二、孵育的三条必知

　　1.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标 板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发;

　　2.洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;

　　3.同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。

　　三、ELISA洗涤小技巧

　　洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直 接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响*后的酶标仪读数。

　　四、反应时间的控制

　　加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔 10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。

　　五、操作说明

　　1.封板膜只做一次性使用。

　　2.标本中待测物质含量过高时先将样本稀释一定倍数后再测定，计算时请乘以稀释倍数。

　　3.各步加样均使用加样器，并经常校对其正确性，一次加样时间控制在5分钟内(标本数目多的时候，上海研域推荐使用排枪加样)。

　　4.液体标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月;标本溶血会影响检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

　　BUNSEN本生Elisa试剂盒本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

　　ELISA实验原理：ELISA的原理、类型及操作步骤

　　ELISA的原理

　　ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。

　　ELISA方法类型和操作步骤

　　elisa可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。

　　(一)双抗体夹心法

　　双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：

　　(1)将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。

　　(2)加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。

　　(3)加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。

　　(4)加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。

　　根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。

　　(二)双位点一步法

　　在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。这种双位点一步不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。

　　在一步法测定中，应注意钩状效应(hookeffect)，类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。

　　(三)间接法测抗体

　　间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：

　　(1)将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。

　　(2)加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。

　　(3)加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接dibiao记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人IgG抗体。

　　(4)加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。

　　本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。

　　(四)竞争法

　　竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下：

　　(1)将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤。

　　(2)待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原，则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原，则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合，竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原，保温后，酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量。洗涤。

　　(3)加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原最多，故颜色最深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差，代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡，表示标本中抗原含量越多。

　　(五)捕获法测IgM抗体

　　血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗本多用捕获法，先将所有血清IgM(包括异性IgM和非特异性IgM)固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。操作步骤如下：

　　(1)将抗人IgM抗体连接在固相载体上，形成固相抗人IgM。洗涤。

　　(2)加入稀释的血清标本：保温反应后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。

　　(3)加入特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性IgM结合。洗涤。

　　(4)加入针对特异性的酶标抗体：使之与结合在固相上的抗原反应结合。洗涤。

　　(5)加底物显色：如有颜色显示，则表示血清标本中的特异性IgM抗体存在，是为阳性反应。

　　(六)应用亲和素和生物素的ELISA

　　ELISA实验原理：ELISA的原理、类型及操作步骤!本生(天津)健康科技有限公司由具有行业背景和丰富市场经验的专业人士组成，于为生命科学研究领域提供产品，为广大科研工作者提供服务。 既能满足研发类客户对产品种类、包装的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

　　本生阐述：Elisa试剂盒的温育如何进行？
 

　　Elisa试剂盒的操作因固相载体的形成不同而有所差异，良好的仪器和正确的操作是ELISA检测结果准确可靠的必要条件。国内医学检验一般均用板式点。

　　Elisa试剂盒的操作步骤：

　　方法一：用于检测未知抗原的双抗体夹心法:

　　1. 包被：用0.05M  PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。

　　2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

　　3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

　　4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

　　5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6.   结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：小鼠ELISA试剂盒反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或较浅，依据所呈颜色的深浅，以“+"、“-"号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

　　18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。

　　方法二：用于检测未知抗体的间接法：

　　用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,zui后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法"的4、5、6。

　　其中还有一个步骤特别需要注意那就是洗涤：

　　洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。

　　ELISA试剂盒本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

　　本生—ELISA试剂盒检测注意事项汇总

　　以下是本生技术小编总结：影响ELISA检测的关键因素，也是众多ELISA 用户在实验中经常遇到的问题及解决方案：

　　Q1：为什么所有试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作?

　　A1：温度是ELISA结合反应的重要影响因素。为了使所有样本在一致的温度下反应，实验前务必将所有试剂平衡至室温，包括检测样本。避免因温度的动力学反应差异而导致ELISA检测结果的不准确。

　　Q2：为什么标准曲线线性较差?

　　A2：按照推荐方式保存标准品;溶解标准品之前需短暂离心，彻底收集粉末;确保标准品完全溶解和混匀(大约10min)，然后再进行后续的系列稀释步骤，确保每一步都充分混匀且精确移液;显色的恰当终止;选择合适的数学拟合方程绘制标准曲线。

　　Q3：ELISA实验为什么必须设置复孔?

　　A3：为获得更准确的实验结果，强烈建议标准品及样本进行复孔检测。

　　因为复孔检测可以：

　　★计算平均值，确保实验结果更准确;

　　★解决实验中误操作造成的跳孔现象;

　　★计算CV值，对实验的操作和试剂盒的精密度进行评估。

　　Q4：为什么实验过程中孵育、洗涤需要振荡?如何振荡?

　　A4：振荡孵育使反应更充分，振荡洗涤使背景更干净。建议使用酶标专用96孔微孔板振荡器。

　　孵育过程振荡，可以加快、加强抗原抗体间的相互碰撞接触，使得反应过程更加完全，OD值通常会比未振荡孵育的结果要高;洗涤过程振荡，可以使洗板更干净，在很大程度上能降低背景值，同时可以提高试剂盒检测的灵敏度。

　　具体操作请参见说明书或致电劲马生物

　　Q5：何时终止ELISA反应?

　　A5：ELISA实验最终需要酶催化底物显色反应来完成，在最合适的时间终止反应是ELISA实验成功的重要因素。在HRP-TMB酶反应系统中，当最高浓度标准品颜色不再变深，倒数2-3个浓度标准品颜色开始有浅蓝色时，便需要终止反应;或者也可以根据最高浓度标准品孔在620nm的OD值来决定，OD620=0.9-0.95之间时即可终止。

　　Q6：为什么酶标仪读数时必须选用双波长?

　　A6：首先，酶标仪使用前务必预热10-15min，使测读结果更稳定。其次，ELISA实验采用双波长测定吸光度，可以排除单波长检测时的测定干扰(标本的浓度，干扰色等)。一般采用波长作为参照波长，在参照波长下，检测物的吸光值最小，检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收;因此，双波长测定，可最大限度的消除指纹、杂质及不透光的物质对酶标仪读数带来的误差，以保证实验数据的准确度。

　　本生ELISA检测 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

GGC-W温控翻转振荡器操作说明

（来源：北京国环高科自动化技术研究院）

　　本生阐述：384孔板在测量上的注意事项?

　　384孔板是一种用于我们实验室中使用广泛的装置，这种装置具有很多的保存检测性能，今天我们就来为你详细介绍下384孔板在进行测量上的注意事项具体都有哪些?下面就让天津本生小编为你详细介绍下。

　　1、使用液体分配器添加液体时，液体添加头不能混合。

　　2、清洁电路板并清洁。如果条件允许，使用洗衣机清洁板，以避免交叉污染。

　　3、根据试剂盒的说明，反应时间应准确。

　　4、测量期间请勿触摸微孔板。在运输过程中注意防止微孔板挤压手。

　　5、不要将样品或试剂洒在仪器表面或内部。操作完成后，请务必洗手。

　　6、如果使用的样品或试剂对污染，毒性和生物特性有害，必须严格按照试剂盒的使用说明进行操作，以免对操作人员造成伤害。在接触受污染或传染性物质后，必须对仪器进行清洁和消毒。

　　7、测量期间请勿关闭电源。

　　8、对于试剂盒引起的测量结果的偏差，应根据实际情况修改参数，以达到较好的效果。

　　384孔板在测量上的注意事项?!本生(天津)健康科技有限公司由具有行业背景和丰富市场经验的业人士组成，于为生命科学研究域提供产品，为广大科研工作者提供服务。 既能满足研发类客户对产品种类、包装的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

试验操作步骤：

1、 把测试电流主机数据线和加热装置数据线，分别与电脑连接好

2、 把电极线与电流主机连接好，（红色线-电压，黑色线-接地，BNC接头-电流） 

3、 把测试试样平整放置在平板电极上，并把上电极居中放置好

4、 打开烘箱开关，和测试电流主机电源开关（建议供电后预热几分钟）

5、 打开试验软件，输入试验参数后，点开始试验

6、 试验结束后，会有提示，可以对数据进行保存和导出。

7、 连续做下次试验时，只需要更换试样即可。

设备组成：

1、高电阻微电流测量仪

2、电热恒温加热试验箱

3、测试电极

4、测试系统

注意事项

   1、开机顺序：先开主机，再打开软件

   2、试验环境：好是通风环境

   3、加热功率：大于1.5KW

   4、测试过程：测试过程中，不要触摸数据线

   5、屏蔽干扰：远离有磁场干扰的测试设备

　　ELISA试剂盒操作注意事项您知道吗?

　　ELISA试剂盒的操作注意事项：

　　1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请乘以总稀释倍数(×n×5)。

　　5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物请避光保存。

　　7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

　　8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9.本试剂不同批号组分不得混用。

　　10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

　　ELISA试剂盒--注意事项：

　　◆标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。保存过久可发生聚合在ELISA中可使本底加深。

　　◆冻结标本溶解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混合，不要在混匀器上强烈震荡。

　　◆浑浊或有沉淀的标本应先离心或过滤，澄清后再检测。

　　◆反复冻融会使蛋白效价降低，所以代测样本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。

　　ELISA实验标准曲线平直，一般有以下原因：标准曲线制备是否不当，洗孔不净，吸孔不充分，读数不准确或是吸量误差。查找原因，即可找到相应解决方案。

　　ELISA试剂盒操作注意事项您知道吗?本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

　　猴白介素4(IL-4)ELISA试剂盒操作步骤及样本处理

　　猴白介素4(IL-4)操作步骤：

　　1.加入50ul标准品(Standards)、血清标本于相应反应板孔中。

　　2.每孔加入100ul酶联物(Conjugate)，轻轻混匀30秒(重要)，室温60分钟。

　　3.洗板：甩尽板内液体，用蒸馏水或者洗涤液(普通洗涤液，自配)洗涤反应板，并去除 水滴(在厚叠吸水纸上拍干);这样反复洗涤5次。

　　4.每孔加入100ul显色液，轻轻混匀10秒，室温20分钟。

　　5.每孔加入50ul终止液(StopSolution)。轻轻混匀30秒;30分钟内在450nm处读OD值。elisa试剂盒

　　样本处理及要求：

　　1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

　　2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

　　3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

　　4.,细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

　　6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

　　7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

　　猴白介素4(IL-4)ELISA试剂盒注意事项：

　　1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请乘以总稀释倍数(×n×5)。

　　5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物请避光保存。

　　7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

　　8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9.本试剂不同批号组分不得混用。

　　10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

　　猴白介素4(IL-4)ELISA试剂盒操作步骤，本生生物小编就分享到这了，看完本文您就应该有了基本的认识和了解相信大家都明白了吧!总的来说，希望对大家有所帮助。