GX液相色谱的原理，使用时的注意事项

液相色谱是我们常用的仪器，也很好操作，但是在使用过程中，还是需要注意一些的，以免发生错误浪费时间和资源。那么我们有哪些方面是要注意的呢？或者使用液相色谱的时候常见的问题有哪些？

1. 过滤流动相：我们的柱塞、密封环、缸体和单向阀等设备在日常中都会被灰尘杂质磨损，在进行试验操作前应该先除去流动相中的杂质微粒，进行蒸馏，可以用滤器、砂滤棒（或片），输液泵的滤器也应当经常清洗或更换。

2. 注意流动相不能空瓶：时时注意溶剂瓶内的流动相，不要空瓶，防止流动相用完，空泵运转会破坏实验仪器设备。

3. 流动相不能乱选：溶剂必须互溶才能作为梯度洗脱的流动相，不同的溶剂搭配不同的比例也可能互溶或者不能互溶，要注意搭配剂量。

4. 注意混合溶剂的粘度：不同的溶剂组合，粘度会有变化，从而在梯度洗脱是出现压力变化，所以要注意这个压力不能超过输液泵和色谱柱能承受的压力。

5. 使用完要及时清洗泵：使用完后有缓冲液的流动相要及时清理掉，不能长时间留在泵内，时间久了会析出盐的晶体，跟灰尘杂质一样会损坏密封环和柱塞等。所以一定要及时清洗泵，换成有利于维护色谱柱和输液泵的溶剂。

等等，这里是常用几个注意事项，大家在使用时一定记得哦。

氢气发生器主要由电解系统、压力控制系统、净化系统和显示系统组成。通过电解水产生氢气，产生的氧气则放空进入大气。具有电解面积大、池温低、性能好、产气量大、纯度高的优点。
高纯氢气发生器的使用注意事项：
1、将仪器背面出气口的密封螺母取下。(请将其保存好，以便今后自检仪器用。)
2、用一根外径Φ3气路管将自检合格的氢气发生器出气口与色谱仪氢气进气口连接，拧紧螺母密封性必须良好。
3、气路连接好以后，打开氢气发生器电源开关。与色谱仪联机使用。
4、仪器使用时应注意流量指示是否与色谱仪用气量一致，如流量指示超出色谱仪实际用量较大时，应停机检漏，其方法参照仪器的故障原因与排除方法进行调整，再用自检方法检查合格后方可使用。
5、定期检查过滤器中的硅胶是否变色，如变色请马上更换或再生。其方法为，拧下过滤器，再拧开过滤器上盖，更换硅胶后拧紧过滤器上盖，将过滤器装到底座上拧紧。并检查是否漏气。
6、仪器使用一段时间后，电解液会逐渐减少，当电解液位接近下限时应及时补水，此时只需加入二次蒸馏水即可，加液或加水时液位不要超过上限，也不能低于下限。
7、当仪器使用半年后，请更换电解液。(氢气发生器使用氢氧化钾溶液的浓度为10%左右。)
8、仪器切勿在压力为"0"时空载运行。空载运行时会将电解池和开关电源部件烧坏。造成整个仪器损坏。
9、用户不要自行将电解池拆卸打开，(用户无法自行修理)以免影响整机运行。
10、仪器如需搬运时请将储液桶的电解液用洗耳球吸干净，装好内盖后将外盖拧好，以免残留的电解液在运输时外溢，将整个仪器腐蚀造成无法修复的后果。

COD在线检测仪在我们的生活中应用广泛，我们通常在污水厂、食品、化工、制药以及环境保护等领域中对污水进行检测的时候能够看见它的身影。同时，我们在实验室以及野外的时候也十分需要该仪器来对污水中的需氧量进行测量。

COD在线检测仪使用时注意事项:

1.仪器要在加热恒定后开始使用，保证实验的准确性和仪器的正确使用。

2.对化学需氧量高或者是悬浮物含量高的样品可多次稀释，然后再取适量的分析，注意稀释时取的废水原样不得少于5ml。

3.小心插入温度计，以免破碎，达到所需工作温度后,将温度计取出。

4.加热热管前加入小瓷粒，不能加玻璃珠，将溶液摇匀，防止爆沸。小瓷粒用完后，用蒸馏水烘千备用。

工业超声波清洗机使用时需的注意事项：

　　1.在使用工业清洗机的时候Z重要的就是要保证清洁设备在具体的操作中稳定性，这样在长时间的使用中不会因为电机过热而产生质量上的损坏，需要对材料的使用进行一定的处理保证在工作中有效性。

　　2.通常在使用过程中也需要对清洁设备的具体操作知识进行了解，这样在进行操作的时候就能很好的将其效果表现出来。有些材料在使用过程中Z容易产生结垢现象，因为这种材料在使用中很容易与灰尘相接触，并且包含一些具有粘和作用的物质，这样在使用中就容易产生严重的影响。

　　3.工业超声波清洗机在使用中有一定的操作标准，在进行操作的过程中Z好能够将其在使用中的性能进行一定的保护，使其能够在使用中做到有效的成本控制，这样的在使用中就能很好的控制工作效果。在使用过程中要对材料的使用进行处理，保证其在工作性能的稳定性。

  　4.一般在使用工业超声波清洗机的时候要注意这种机械工作条件的稳定性，同时也要对一些条件进行调整使能够在工作中实现良好的工作效果。清洗机在使用中要做到对工作环境的适用性，因为工作中不能做到对每一种物资进行针对性的处理，所以必须保证在使用中的具体效果的稳定。在一些污染严重的工业生产车间里，如果出现的质量上的损失就会对其在使用中的效果产生比较严重的反作用，妨碍清洗设备的使用功能，所以需要在使用中做到有效的成本控制，这样在工作中就能很好的将其在使用中的效果发挥出来。

    5.如发现清洗机有异常，非专业人员请勿擅自拆装设备。应及时联系昆山市超声仪器有限公司售后部0512-57498821，或者联系销售区域负责人。

（来源：昆山市超声仪器有限公司）

　    1、试验过程中不能让无关人员靠近，因本试验仪器可产生较高的电压，未经过培训的人员不能使用该设备。试验时要有监护人员，不要单人使用，以防万一发生意外情况。

　　2、长时间不使用设备，在再使用时，先让仪器空载加压一次，即把高压电的接线从均压球上取下，查看计算机试验界面，看看高压电压是否正常。

　　3、试验中发生意外情况要及时切断电源，问题处理后才能继续试验。

　　4、设备安放要平稳，安放的地面要坚固。

　　5、该设备在使用中外壳要接保护地线，既设备外壳接大地，以保护操作人员和设备运行的安全。

　　6、使用完设备后，要关掉系统各部分电源，不准带电插拔电源线。

　　7、要按规定的电源电压接入设备，确保电路接线正确，否则会损坏设备。

　　8、耐电弧试验仪需安置在室内，实验室应整洁、干燥、无腐蚀性介质，非相关人员不要随意操作。

　　9、不要让设备电缆碰到尖边，以免划破电缆绝缘；不要让电缆压在重物之下，以免压断电缆引起火灾；不要用电缆拉物体或用电缆捆绑物体，以免拉断电缆使设备不能正常运转。

　　10、不要让设备碰到水溅，腐蚀性气体，可燃气体和可燃物，如果不避免，可能火灾。

　　11、搬动设备时，要切断设备电源，既要把插头从插座中拔下，禁止搬动设备时放倒设备或倾斜45°角以上。

　　12、不要在设备运行时插拔设备的电源插头。

　　耐电弧试验仪安全说明：

　　1、试验在试验箱中进行，试验箱门打开时电源加不到高压变压器输入端。

　　2、设备要安装单的保护地线。接保护地线，主要是减少试样击穿时对周围产生的较强的电磁干扰，也可避免控制计算机失控。

　　3、该试验设备的电路设有多项保护措施，主要有：过流保护、失压保护、漏电保护、短路保护等。

液相色谱对于多数人来说都是很好上手的仪器了，但是就算是用过几年、经验丰富的分析员都会习惯于一些错误的操作，经常导致一些仪器故障。方便快捷的分析过程固然重要，但是为了多做样品而忽略了一些必不可少的步骤，往往得不偿失，哪些操作不能做？哪些懒儿不能偷？那些小概率的故障师傅没教怎么办？液相使用过程中有哪四大关键因素要注意？

流动相不过滤

因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。流动相Z好在玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是滤过，可采用Millipore滤膜（0.2μm或0.45μm）等滤器。泵的入口都应连接砂滤棒（或片）。输液泵的滤器应经常清洗或更换。

使用后没有及时清洗泵

流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。如果将含缓冲液的流动相留在泵内，由于蒸发或泄漏，甚至只是由于溶液的静置，就可能析出盐的微细晶体，这些晶体将和上述固体微粒一样损坏密封环和柱塞等。

因此，必须泵入纯水将泵充分清洗后，再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂（对于反相键合硅胶固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。

流动相走空

泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，Z终产生漏液。

没有流动相流出，又无压力指示怎么办？

可能是泵内有大量气体，这时可打开泄压阀，使泵在较大流量（如5ml/min）下运转，将气泡排尽，也可用一个50ml针筒在泵出口处帮助抽出气体。另一个可能原因是密封环磨损，需更换。

压力和流量不稳了？

原因可能是气泡，需要排除；或者是单向阀内有异物，可卸下单向阀，浸入丙酮内超声清洗。有时可能是砂滤棒内有气泡，或被盐的微细晶粒或滋生的微生物部分堵塞，这时，可卸下砂滤棒浸入流动相内超声除气泡，或将砂滤棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）内迅速除去微生物，或将盐溶解，再立即清洗。

压力为啥过高或过低？

 可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。压力降低的原因则可能是管路有泄漏。检查堵塞或泄漏时应逐段进行。

在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视：

PS：（在液相色谱中对组分复杂的样品采用梯度洗脱的方法。在同一个分析周期中，按一定程序不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。

梯度洗脱的优点：1.缩短分析周期；2.提高分离能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加灵敏度。但有时引起基线漂移。）

梯度洗脱的流动相选择不当

要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。

当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。

忽略的空白梯度洗脱

梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。

用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。

忽略了溶剂混合所带来的粘度变化

混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的Z大压力。

关于六通阀的正确使用和维护

①样品溶液进样前必须用0.45μm滤膜过滤，以减少微粒对进样阀的磨损。

②转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置，否则流动相受阻，使泵内压力剧增，甚至超过泵的Z大压力；再转到进样位时，过高的压力将使柱头损坏。

③为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中，每次分析结束后应冲洗进样阀。通常可用水冲洗，或先用能溶解样品的溶剂冲洗，再用水冲洗。

关于色谱柱的使用和维护

色谱柱的正确使用和维护十分重要，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。

调节流速太快。。。

避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓（如前所述）。

反冲色谱柱。。。

一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。

预柱和保护柱

选择使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。

避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。

液相色谱在使用过程中主要有四大关键因素

1.液相色谱仪本身：

对于仪器本身一般不会有问题，特别是刚买回来的新仪器。对于仪器本身Z重要的就是仪器的校验，刚买回来的仪器一般都是由卖家先对仪器做系统的确认工作（包括IQ、PQ、OQ），确认顺利通过后，再请国家或省级仪器检定局的来校验，检定合格后就可以放心使用了，除此之外，一些做得好的公司每半年会对仪器进行一次的内部校验，目的就是为了保证仪器的正常可运行状态。

2.色谱条件：

色谱条件一般包括流动相、色谱柱、检测波长、流速及进样量。

流动相就涉及到配制流动相所用到的水和试剂试液，水一般要求用超纯水或其他水的电阻率不大于18.2兆欧级别，试剂试液要求用色谱级别的，原因为防止水和试剂试液中的杂质对色谱结果的干扰。

色谱柱会因不同的品种而有不同的要求，但每根色谱柱都有它的清洗要求，这个在色谱柱说明书上都可以找到，一定要根据上面的要求进行，否则会造成色谱柱效下降和色谱柱的使用寿命缩短，检测波长也会因品种的不同有不同的要求，这里需要指出的是要注意观察检测器氘灯能量的变化，比如基线波动大，活性成分的响应值突然变小等，都有可能是氘灯的能量不足所引起的，氘灯一般建议使用800小时，但实际上使用时间不止，可根据实际情况更换。

流速也因品种的不同而不同，一般为1.0ml/min，流速是不可随意改动的，特别是作为QC人员，但是作为研发人员，有时为了摸索条件或进行方法耐用性验证，会对流速进行改变以评价方法的适用性。对于进样量因不同的品种也有不同规定，进样量这块现在都使用自动进样，所以进样精密度都很好，不需强调什么。

3.操作人员：

首先，作为液相操作人员，一定要认真学习夜想的说明书，掌握液相硬件和软件的操作，掌握日常的维护保养，掌握Z基础故障的排除和维修。

一般液相的操作规程也是有操作人员起草的，所以只要严格按照操作要求进行操作，一般不会出现问题，当然啫喱需要特别指出的是对于液相的日常维护保养很重要，比如流动相的过滤、脱气、泵密封垫的清洗、系统管路的清洗、溶剂过滤头的清洗等，倘若不坚持，很容易导致色谱柱堵塞、系统压力过大、色谱峰异常等不必要的故障，浪费时间。

其次，操作人员在配制液相分析用样品溶液时，Z好由同一个人单独完成，以免不必要的偶然误差。

4.液相安装环境：

液相色谱仪应尽量安装于水平、远离振动、电磁干扰的屋内的台面上，有条件的话尽量将液相数据处理系统分隔开，一个是防止色谱基线噪音偏大，基线不稳等，一个是为减少对人体的危害。

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