JM110感受态细胞如何制作

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  甘逊源 2013-02-23 00:00:00

  跟其他的一样的吧。 一、 受体菌的培养 从LB平板上挑取新活化的E. coli JM110单菌落，接种于3-5ml LB液体培养基中，37℃下振荡培养12小时左右，直至对数生长后期。将该菌悬液以1:100-1:50的比例接种于100ml LB液体培养基中，37℃振荡培养2-3小时至OD600 ＝0.5左右。 二、 感受态细胞的制备 ( CaCl2 法) 1. 将培养液转入离心管中，冰上放置10分钟，然后于4℃下3000g离心10分钟。 2. 弃去上清，用预冷的0.05mol/L的CaCl2 溶液10ml轻轻悬浮细胞，冰上放置15-30分钟后，4℃下3000g离心10分钟。 3. 弃去上清，加入4ml预冷含15%甘油的0.05mol/L的CaCl2 溶液，轻轻悬浮细胞，冰上放置几分钟，即成感受态细胞悬液。 4. 感受态细胞分装成200μl的小份，贮存于-70℃可保存半年。

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  zoubangmin 2012-10-09 00:00:00

  跟其他的一样的吧。 一、 受体菌的培养 从LB平板上挑取新活化的E. coli JM110单菌落，接种于3-5ml LB液体培养基中，37℃下振荡培养12小时左右，直至对数生长后期。将该菌悬液以1:100-1:50的比例接种于100ml LB液体培养基中，37℃振荡培养2-3小时至OD600 ＝0.5左右。 二、 感受态细胞的制备 ( CaCl2 法) 1. 将培养液转入离心管中，冰上放置10分钟，然后于4℃下3000g离心10分钟。 2. 弃去上清，用预冷的0.05mol/L的CaCl2 溶液10ml轻轻悬浮细胞，冰上放置15-30分钟后，4℃下3000g离心10分钟。 3. 弃去上清，加入4ml预冷含15%甘油的0.05mol/L的CaCl2 溶液，轻轻悬浮细胞，冰上放置几分钟，即成感受态细胞悬液。 4. 感受态细胞分装成200μl的小份，贮存于-70℃可保存半年。

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