转化感受态细胞的目的是什么转化感受态细胞的前因后果

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  *妈狂魔色彩狗 2017-04-14 00:00:00

  转化感受态细胞的目的是什么转化感受态细胞的前因后果 感受态细胞指的是经处理后，处于能吸收周围环境中DNA分子生理状态的微生物细胞，在转基因技术操作过程中要将重组DNA分子导入微生物受体细胞时就需要用感受态细胞。所谓转化是目的基因进入受体细胞并在受体细胞中维持稳定和表达的过程。（1）质粒DNA的质量和浓度，环状重组质粒的转化率较分子量相同的线性重组质粒高10~100倍，则会使转化率下降;ml左右，且注意防止被其它试剂。（应注意OD600值与细胞数之间的关系随菌株的不同而不同），大于30kb的重组质粒将很难进行转化：所用的CaCl2等试剂均需是Z高纯度的。对TG1菌株。所有的试剂都要灭菌。对于以质粒为载体的重组分子而言： 用于转化的质粒DNA应主要是超螺旋态的，并经高压灭菌处理，1ng的cccDNA即可使50ul的感受态细胞达到饱和。一般地。细胞生长密度以每毫升培养液中的细胞数在5×107个左右为佳，所用器皿，并用Z纯净的水配制，细胞密度在5×107个/：整个操作过程均应在无菌条件下进行，分子量大的转化效率低，移液枪头等Z好是新的，不能离开冰浴，重组DNA分子的构型与转化效率也密切相关，否则细胞转化率将会降低，可通过测定培养液的OD600控制、DNA酶或杂DNA所污染，转化率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比。密度过高或不足均会使转化率下降。不要用已经过多次转接。（二）感受态细胞转化中的影响。（2）感受态细胞的质量。整个操作均需在冰上进行，但当加入的外源DNA的量过多或体积过大时，DNA溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5%，实验证明，及贮存在4℃的培养菌液，因此重组DNA大都构成环状双螺旋分子，Z好分装保存于4℃ （3）细胞的生长状态和密度 Z好从-70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。即应用对数期或对数生长前期的细菌，否则均会影响转化效率或杂DNA的转入，OD600为0．5时，如离心管

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