橡胶双头切片机 可塑度切片机的操作步骤及注意事项

　　本生阐述：elisa操作步骤说明及注意事项

　　酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay(简写ELISA)，指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。要知道elisa操作步骤首先我们先了解一下elisa的原理是什么。

　　elisa的原理：

　　①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。

　　②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性， 又保留酶的活性。在测定时，把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体 上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物， 产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据焰色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到 很高的敏感度。

　　elisa操作步骤：

　　方法一　用于检测未知抗原的双抗体夹心法:

　　1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。

　　2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

　　3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

　　4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

　　5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越 强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则 410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

　　方法二　用于检测未知抗体的间接法：

　　用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日 洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔 中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体

　　以上是elisa操作步骤，那么在elisa操作步骤的操作步骤中需要注意什么呢?下面是elisa实验的注意事项：

　　1.正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。

　　2.在elisa操作步骤中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括：固相载体的选择、包被抗体(或抗原)的选择、酶标记抗体工作浓度的选择、酶的底物及供氢体的选择

　　elisa试剂盒 本生(天津)健康科技有限公司是一家从事健康科技技术开发销售的公司，本生生物公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准。本生(天津)健康科技有限公司由具有行业背景和丰富市场经验的业人士组成，于为生命科学研究域提供产品，为广大科研工作者提供服务。 既能满足研发类客户对产品种类、包装的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。

试验操作步骤：

1、 把测试电流主机数据线和加热装置数据线，分别与电脑连接好

2、 把电极线与电流主机连接好，（红色线-电压，黑色线-接地，BNC接头-电流） 

3、 把测试试样平整放置在平板电极上，并把上电极居中放置好

4、 打开烘箱开关，和测试电流主机电源开关（建议供电后预热几分钟）

5、 打开试验软件，输入试验参数后，点开始试验

6、 试验结束后，会有提示，可以对数据进行保存和导出。

7、 连续做下次试验时，只需要更换试样即可。

设备组成：

1、高电阻微电流测量仪

2、电热恒温加热试验箱

3、测试电极

4、测试系统

注意事项

   1、开机顺序：先开主机，再打开软件

   2、试验环境：好是通风环境

   3、加热功率：大于1.5KW

   4、测试过程：测试过程中，不要触摸数据线

   5、屏蔽干扰：远离有磁场干扰的测试设备

　　细胞培养的步骤及注意事项

　　一、 复苏

　　1. 把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟)，拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

　　2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来)，1000转离心5分钟。

　　3. 把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。

　　4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。

　　5. 3天换一次培养基。

　　二、 传代

　　1. 培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。

　　2. 把原有培养基吸掉。

　　3. 加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行)，消化1-2分钟。

　　4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。

　　5. 用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。

　　6. 把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。

　　7. 倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。

　　8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。

　　三、 冻存把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。 冻存液的配制： 70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。

　　细胞培养的步骤及注意事项,先和大家介绍到这，如果想要了解更多离心管的信息，可以关注天津本生生物，业给生物医药客户提供生物实验室检测耗材，欢迎广大客户来询。