生物学实验中病毒怎么保种和接种？

mt4k099 2011-12-06 21:15:49 290 浏览

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djickfjsjsjf 2011-12-07 00:00:00

鸡蛋

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28119017lg 2011-12-08 00:00:00

一般是低温保种，这时候它的活性降低接种，也就是使得病毒恢复感染活力，一般就是侵染细胞，扩增繁殖。。。

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凌乱了oo 2011-12-09 00:00:00

1.应该在细胞状态Z好的时候，进行病毒接种或复苏; 2.接种前头天，进行细胞传代，细胞数量应以能让细胞在第二天内达到覆盖满90%的培养瓶为准，并且一定要在细胞传代后48h内接种病毒; 3.第二天细胞长为单层且状态较好时，开始接种病毒; 4.先移弃培养瓶中的生长液，用1*PBS轻轻洗细胞面3次，Z后用移液管吸干净培养瓶中残留的1*PBS.为保持培养瓶中pH环境的稳定，及减少1*PBS对细胞的刺激作用，可再用生长液轻轻洗细胞面1次，移弃液体，并用移液管吸干净瓶中残留生长液; 5.接种病毒: ①. 一般种毒量按Z后所需加入维持液体积的10%，15%或20%来计算，一般10%即可，若希望病变速度快一些，可以加大种毒量，如15%或20%; ②. 如果用小塑料瓶种毒，一般该培养瓶加8-9ml培养液，加入0.8ml病毒即可，病毒加入后，盖上瓶塞，轻轻将摇晃瓶子，让病毒液在细胞面上来回10几次; ③. 在对照细胞中，加入相同的0.8ml维持液; 6.将种毒瓶和对照瓶一起放入37oC，CO2烘箱培养1h，其中每隔15min，需要将种毒瓶和对照瓶拿出，轻轻摇晃瓶子，保证病毒液或维持液能在细胞面上来回20-30次，使病毒液或维持液能充分接触细胞; 7.1h后，在晃动瓶子4次后，重新进入无菌间，在培养瓶中加入维持液; ①. 维持液配方一: MEM 2鸖 3%谷氨酰胺 1%双抗 NaHCO3(其用量以调节pH至7.0为准，浓度为6%); ②. 维持液配方二: MEM 3%谷氨酰胺 1%双抗 NaHCO3(其用量以调节pH至7.0为准，浓度为6%); ③. 一般还是使用有FBS的维持液，因为对细胞有一定的保护作用; 8.将加完维持液的培养瓶放回37oC，CO2烘箱培养，每天观察，如果有条件，可以每天拍照，直到有90%的细胞出现CPE后，可以进行收毒; 9.收毒可以用反复冻融方法:即将细胞培养瓶放入-20oC冰箱，冻起来后，直接拿出来等起融化后，使劲摇晃瓶子，让细胞破裂释放出病毒颗粒，这样反复4次，即可达到收毒目的; 10.收毒后的病毒液可以用移液管吸入离心管，在1，000-2，000转下离心10mins，以此除去细胞碎片，将离心后的上清夜转移，弃底部沉淀，该上清液即可用于病毒浓缩醇化，或病毒滴度测定，或中和试验等。

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离心实验中的生物安全防范，千万别忽视病毒气溶胶

安全是实验的第一守则，对于离心实验而言，样品的配平，运行时不要超载、超速等，都是需要我们时刻注意的事项。而在这些可见的安全因素之外，我们往往忽视了一些不可见的安全事项：比如离心实验中产生的气溶胶的危害。

什么是气溶胶？

是指悬浮在气体介质中的固态或液态颗粒（0.1~100um）所组成的气态分散系统。

气溶胶的危害：

飞沫在空气悬浮过程中失去水分而剩下的蛋白质和病原体组成的的核，通过气溶胶的形式漂浮，造成病原体的传播过程。

病毒离心实验中的生物安全：

随着疫情的影响，人们对于生物安全的重要性及关注程度大大提高，实验室人员开始考虑他们所用的仪器是否合符生物安全的要求，尽量减低实验室人员在实验过程中受细菌或病毒感染的机会。

由于病毒学研究工作者经常使用离心机进行病毒的提取和纯化过程，在该过程中很容易产带有病毒的气溶胶。病原微生物气溶胶不仅会污染环境、干扰检测结果，一些高危的病毒气溶胶甚至会危害实验者的健康甚至生命。

贝克曼库尔特公司在离心机、转头及离心管上的设计之处就进行了生物安全性的考虑，保证工作人员在做离心实验时能尽量避免受到生物气溶胶的影响，保障实验室人员的人身安全。

生物安全离心机：

我们的超速离心机和高速离心机系统，可选装生物安全过滤系统，通过将制药级气体除菌过滤器安装在真空泵和离心腔之间，能够有效隔离离心时产生的气溶胶，避免气溶胶从离心腔外溢至实验室空气中。

Optima MAX-XP

Optima MAX-TL

对于需要在生物安全柜内进行传染性病毒纯化的操作者，我们能提供Optima MAX系列台式超速离心机，该系统能够完全符合世界卫生组织对处理危险样品（如传染性病毒）的生物安全要求。

生物安全转头：

除了离心机主机部分，我们也提供经过生物安全验证的转头 (Biosafety certified rotor)。通过实验验证保证其密闭性，转头内的样品瓶可在生物安全柜内打开，确保漏出的样品保留在瓶内，不会外溢给实验人员带来接触风险。Aerosolve生物安全密封杯，全透明设计可使取样前360°全方位观测到杯内样品状况，及时发现损坏和泄漏，防止气溶胶外溢。部分转头具有双重锁定转头盖 (Dual Locking Rotor Lid)可保持转头从离心腔拿出至安全柜时处于密封状态。

生物安全耗材：

离心耗材部分的离心管、离心瓶等材料都有生物安全认证，尤其是专为分离威胁样品而设计的快封管，可极大保证分离危险样品的生物安全性。带有多重保护盖的离心瓶 (Multi-sealing cap)，可进一步防止气溶胶及危险样品溢出到转头和离心腔内。通过将样品置于一次性的收集袋中，一步封口减少液体溢出，大幅度地减少操作人员对生物样品的接触，同时提升离心效率。

甚至真空脂、润滑油等耗材，我们也进行了第三方生物安全认证。只有整个系统都具备生物安全特性，才能最大程度保证仪器使用的生物安全。

2022-02-24 14:21:23 585 0