SDS-PAGE检测蛋白质分子量的基本原理

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  a1152136790 2013-01-17 00:00:00

  你不是自己说了很多了吗。在我的理解，本来蛋白质的分子量就很大，不可能测量得很精确，因为使用的标尺也是一些标准蛋白质制成的marker（ladder）。你所引用的不是就有“大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g的SDS－复合物都带上相同密度的负电荷”吗，1g蛋白质对应一定的负电荷，然后复合物电荷数目不同电泳迁移率不同，跟标准蛋白一比较，就测出蛋白质分子量了

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  丿灬东赫银尘丶 2013-01-28 00:00:00

  你少说了一点。 聚丙烯酰胺凝胶能够形成大小均匀的网格状结构，这种网格状结构能够对通过其中的蛋白质分子起到阻碍作用，而阻碍的程度取决于分子的大小。因为与SDS结合之后，分子的大小是受其分子量决定的，因此能够区分出蛋白质的分子量

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  樱风旋律 2016-08-09 15:10:13

  蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠（SDS），大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g的SDS－复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而消除了蛋白质原有的电荷差别，使蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量，而与蛋白质所带的电荷无关，在一定条件下，蛋白质的分子量的对数与电泳迁移率间呈负相关。 操作步骤 1、凝胶制备： 用两块电泳玻璃板制成垂直板槽（不能漏胶），垂直放置.将配制好的分离胶溶液倒入，滴加入无离子水，待凝胶聚集后，倒出无离子水，用吸水纸吸干，倒入浓缩胶，再插入梳子. 2、上样： 分别取样品若干ml于离心管中，按1/1～1/5比例加入5×样品缓冲液，再沸水浴中加热3～5min，取出待用.用微量注射器分别吸取不超过30μl不同浓度的标准蛋白样品和试验样品注入样品槽.点样结束后，调节电泳仪电流到10mA（2～3mA/em），保持电流稳定不变，当溴酚蓝迁移到离分离胶底1～2cm时，即可停止电泳. 3、染色： 电泳完毕后，取出凝胶板，浸入染色液中，在37℃温箱中保温过夜.倒掉染色液，24h后，即可看到清晰的蛋白质条带.

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