流式细胞仪观察细胞周期样品怎样准备

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  wkdrn20110301 2016-08-20 00:00:00

  根据你所购买的试剂盒而定，一般是先用70%乙醇先固定，然后加RNA酶和PI，半个小时左右上机检测就可以了.需要注意的就是加酒精固定的时候要用四度预冷的酒精，缓慢的加，边加边晃动细胞，避免细胞黏连在一起. （1）细胞培养 取对数生长期的细胞，按1X106个/mL以1mL体积接种于6孔板内。培养24h后，加入不同浓度样品。在37 ℃、5 % 的CO2恒温箱中培养24h后终止。 （2）细胞固定 胰酶消化并离心收集细胞（800rpm/min），弃上清，用预冷PBS洗细胞两次，加入预冷70％乙醇， -20℃固定保存。 （3） 细胞染色 离心收集细胞（800rpm/min），以1mL的PBS洗细胞一次，加入500uLPBS含50ug/mL溴化乙锭（PI），100ug/mL RNase A， 4℃避光孵育20分钟。 （4）检测 以标准程序用流式细胞仪检测，汞激发波长488nm，计数8千个细胞，结果用软件WinMDI Version 2.9分析。

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