细胞爬片后观察是不是要在干净的六孔板

超级_大头 2016-12-23 20:53:17 382 浏览

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28119017lg 2016-12-24 00:00:00

细胞爬片后观察是不是要在干净的六孔板 1. 爬片： 24*24盖玻片，刚好用于6孔板。也可用更大的盖玻片，放在大的培养皿中爬片。 2. 盖玻片泡酸过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再置于无水酒清中浸泡6小时，再用三蒸水冲洗3遍（个人认为主要目的是将酸冲洗干净就可以了，如果不干净的话，细胞帖壁不好），放在饭盒或者玻璃培养皿中烘干后进行高压消毒、烤干。 3．盖玻片浸泡75%乙醇10分钟消毒，然后酒精灯上烤干，直接放入培养皿，开始种细胞。ZD是玻片是干净的、无菌的。 4.盖玻片在液体中经常有贴壁吸附力，用一般镊子很难一次性夹起，将注射器针头针尖向背面弄个小钩，这样将爬片轻轻勾起，用小镊子取出就可以。【细胞爬片】 1. 胰酶消化细胞后计数重悬细胞于完全培养基中。 2. 加细胞时，根据玻片的大小，先在每个孔里准备放爬片的位置滴少量培养基，目的是使玻片与培养皿靠培养基的张力粘合到一起，然后放玻片，防止加细胞悬液时玻片漂起，造成双层细胞贴片。整个过程注意无菌操作。 3. 根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可 4. 按照实验设计，作用一定时间后取玻片。注意细胞不能太密，否则容易掉片。【细胞爬片的固定】 1. 细胞爬片取出后，PBS洗2遍。但比如做凋亡的TUNEL染色时就避免洗，因为凋亡的细胞在洗的过程中有可能会脱落。 2.常用的固定液 1.）冷丙酮，可用于一般的免疫组化染色。将纯的丙酮预先放入冰箱-20℃后便为冷丙酮，加入冷丙酮于-20℃（丙酮有很强的挥发性，注意将含有丙酮和爬片的器皿盖严，防止其挥发）固定10分钟。取出后，室温吹干，然后放入-20℃保存。 2. ）多聚甲醛(常用4%)：可用于免疫电镜；也可用于免疫荧光以及TUNEL染色。主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特别是细胞表面抗原，例如各类淋巴细胸分化决定簇(CD)、主要组织相容性抗原等室温固定15分钟后，将表面液体吹干，入-20℃保存 3.） 95％乙醇，可用于免疫组化。优点：穿透性强、抗原性保存较好。缺点：但醇类对低分子蛋白质、多肽及胞浆内蛋白质保存效果较差，使蛋白变性的作用轻，固定后可再溶解；染色过程中，温育时间长，抗原可流失而减弱反应强度室温固定 15分钟后，将表面液体吹干，入-20℃保存 4. ）甲醛()应用Z广优点：形态结构保存好，且穿透性强，缺点：甲醛放置过久可氧化为甲酸，使溶液pH降低，影响染色；分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露。可造成假阴性的染色结果。室温固定15分钟后，将表面液体吹干，入-20℃保存。【细胞爬片的组化染色】 1. PBS清洗标本 3次各2 min。 2. 0.5%Triton X-100( DPBS配) 孵育 1次20min。（此步骤用于胞浆、胞核抗原） 3. PBS清洗标本3次各 2 min。 4. 3%H2O2孵育 15 min。 5. 余下步骤同石蜡切片组化染色。

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细胞爬片的操作方法以及技巧!

　　细胞爬片的操作方法以及技巧!

　　在医学生物研究中，免疫荧光检测等需用到细胞爬片。现有的细胞爬片多采用表面平整、光滑的透明玻璃玻片。但在做免疫荧光检测时，为了节约抗体，需免疫组化笔在爬片上进行范围的圈定，将抗体加入划定区域，免疫组化笔中的疏水成分阻滞抗体溢出所圈定的范围，从而达到节约抗体的目的。细胞爬片是细胞培养中比较经常会用到的，现将自己操作的一些方法与技巧拿与大家分享。

　　细胞爬片的特点:

　　1.玻片表面经过TC处理，双面均可使用。

　　2.γ射线灭菌，保证无菌。

　　3.使用便捷，只需打开包装，将爬片放入孔板内，将细胞悬液滴到爬片上即可培养。

　　4.爬片厚度为0.17mm，直径为8mm/14mm/20mm/25mm.分别适用于48孔细胞培养板/24孔细胞培养板/12孔细胞培养板/6孔细胞培养板。

　　5.吸附：该玻片表面具有阳离子电荷，可以通过静电作用吸附冰冻切片组织或细胞，使之粘附在玻片上，进而在玻璃和切片组织之间形成共价键.因此，无需粘黏剂或者蛋白包被，该玻片也能牢固的粘附切片或细胞。

　　爬片的准备:

　　1、爬片可用一般的盖玻片，也可用专用爬片;

　　2、应用盖玻片，可根据自己的需要剪裁成合适的大小，以备置于6孔板、12孔板或24孔板;

　　3、将剪裁好的爬片，置于浓硫酸中浸泡并过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再用三蒸水冲洗3遍(个人认为主要目的是冲洗干净就可以了)，放在饭盒或者培养皿(一定是玻璃的哦，要不然就……)中烘干后进行高压消毒。

　　培养板的准备:

　　1、泡酸过夜

　　2、冲洗，烘干(1、2步骤与前大致相同)

　　3、放入超净工作台用紫外线照1～2小时就可以用了(在照之前可以将爬片一并放入，若细胞贴壁能力不强，可经多聚赖氨酸浸片后放入。贴壁能力强的话，就可以省略了，进行紫外线消毒)

　　注：此步自己的经验是爬片可以先浸入消毒后的PBS内，紧接着放入培养板内。目的：浸过PBS的爬片依靠表面的液体，可以用培养板孔底贴和紧密，以利于细胞长到爬片上。(自己刚开始做的时候，经常就是细胞全都长在了爬片与培养板之间，爬片上细胞罕见。)

　　细胞爬片:

　　1、胰酶消化细胞后计数

　　2、根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可

　　3、第二天即可进行干预措施　　细胞爬片的操作方法以及技巧!先和大家介绍到这，如果想要了解更多细胞爬片的信息，可以关注天津本生，本生给生物医药客户提供生物实验室检测试剂及耗材，欢迎广大客户来询。

2022-02-28 10:32:31 529 0

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（来源：http://www.mshot.com/kehuanli/20200402.html广州市明美光电技术有限公司）

2020-04-16 17:19:22 365 0