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用做细胞爬片的盖玻片的处理

sxn76988hr 2017-02-17 13:28:34 679  浏览
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全部评论(1条)

  • 健康快乐好不好 2017-02-18 00:00:00
    细胞免疫荧光步骤: 1.细胞爬片;首先是玻片的处理,普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块,先用洗衣粉洗干净,用水冲静烤干,然后泡酸过夜,捞酸后流水洗净,烤干,置于器皿中高压灭菌,然后再烤箱中大约8小时烤干备用。 爬片可以在培养皿 六孔板或24孔板中都可,我选择在培养皿中爬。一为节约经费(培养皿可以重复利用)二来觉得培养皿口大,操作比较方便。培养皿消毒同上,消毒时记得消两把镊子 具体操作是:用胰酶消化好细胞,充分吹打,使之成单细胞悬液(注意:这一点很重要,关系到将来爬出来片子的质量) 取出消毒的培养皿,可以先加少量培养基(以使玻片与培养皿紧密接触),将玻片小心放入摆放其中,然后将单细胞悬液一滴一滴的滴到玻片上。Z后盖上培养皿置于37度5%CO2的暖箱中培养,根据细胞生长状况,24小时或更长时间适时取出爬片。 爬片置于37度PBS中洗三次,每次3到5秒钟,然后在4%多聚甲醛中固定15分钟,然后再用37度去离子水将甲醛冲干净,注意手法轻柔,要不然掉片很厉害。同时操作过程中注意玻片的正反面,要不然真的是前功尽弃。 将做好的爬片置于滤纸上晾干,然后用中性树胶粘在载玻片上。注意一定要等中性树胶彻底干了之后才能做后续实验,要不然玻片会掉下来的,就又是前功尽弃了 做好的细胞爬片可以放在-20保存备用,具体能保存多长时间不太清楚,当然尽量早用。

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  在医学生物研究中,免疫荧光检测等需用到细胞爬片。现有的细胞爬片多采用表面平整、光滑的透明玻璃玻片。但在做免疫荧光检测时,为了节约抗体,需免疫组化笔在爬片上进行范围的圈定,将抗体加入划定区域,免疫组化笔中的疏水成分阻滞抗体溢出所圈定的范围,从而达到节约抗体的目的。细胞爬片是细胞培养中比较经常会用到的,现将自己操作的一些方法与技巧拿与大家分享。

  细胞爬片的特点:

  1.玻片表面经过TC处理,双面均可使用。

  2.γ射线灭菌,保证无菌。

  3.使用便捷,只需打开包装,将爬片放入孔板内,将细胞悬液滴到爬片上即可培养。

  4.爬片厚度为0.17mm,直径为8mm/14mm/20mm/25mm.分别适用于48孔细胞培养板/24孔细胞培养板/12孔细胞培养板/6孔细胞培养板。

  5.吸附:该玻片表面具有阳离子电荷,可以通过静电作用吸附冰冻切片组织或细胞,使之粘附在玻片上,进而在玻璃和切片组织之间形成共价键.因此,无需粘黏剂或者蛋白包被,该玻片也能牢固的粘附切片或细胞。

  爬片的准备:

  1、爬片可用一般的盖玻片,也可用专用爬片;

  2、应用盖玻片,可根据自己的需要剪裁成合适的大小,以备置于6孔板、12孔板或24孔板;

  3、将剪裁好的爬片,置于浓硫酸中浸泡并过夜,第二天先用自来水冲洗20遍,再用三蒸水冲洗3遍(个人认为主要目的是冲洗干净就可以了),放在饭盒或者培养皿(一定是玻璃的哦,要不然就……)中烘干后进行高压消毒。

  培养板的准备:

  1、泡酸过夜

  2、冲洗,烘干(1、2步骤与前大致相同)

  3、放入超净工作台用紫外线照1~2小时就可以用了(在照之前可以将爬片一并放入,若细胞贴壁能力不强,可经多聚赖氨酸浸片后放入。贴壁能力强的话,就可以省略了,进行紫外线消毒)

  注:此步自己的经验是爬片可以先浸入消毒后的PBS内,紧接着放入培养板内。目的:浸过PBS的爬片依靠表面的液体,可以用培养板孔底贴和紧密,以利于细胞长到爬片上。(自己刚开始做的时候,经常就是细胞全都长在了爬片与培养板之间,爬片上细胞罕见。)

  细胞爬片:

  1、胰酶消化细胞后计数

  2、根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可

  3、第二天即可进行干预措施  细胞爬片的操作方法以及技巧!先和大家介绍到这,如果想要了解更多细胞爬片的信息,可以关注天津本生,本生给生物医药客户提供生物实验室检测试剂及耗材,欢迎广大客户来询。

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  首先,根据实验需求选择合适的盖玻片至关重要。盖玻片通常有不同的厚度和尺寸,常见的有0.13mm、0.17mm等厚度,以及不同大小的方形或圆形规格。选择时,需考虑样本类型、显微镜型号及放大倍数。较厚的盖玻片适用于高倍观察,以减少因物镜压迫而破碎的风险;而较薄的盖玻片则适用于低倍观察,能提供更好的透光性和图像质量。

  二、盖玻片的预处理

  在使用前,对盖玻片进行适当的预处理是必要的。这主要包括清洁和干燥两个步骤。

  清洁:由于空气中的尘埃、微生物等可能附着在盖玻片表面,影响观察效果,因此需用干净的纱布或柔软的纸巾轻轻擦拭盖玻片表面,必要时可使用无水乙醇或专用的玻璃清洁剂进行清洗,然后用蒸馏水冲洗干净,后用吹风机或自然风干。

  干燥:确保盖玻片完全干燥后再使用,以免残留水分在显微镜下形成气泡,影响观察。

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