什么是iTRAQMS / MS技术，操作步骤如何？

本文节选自杨国源主编的《实验卒中模型方法学》

书号：ISBN 978-7-313-21776-9

大鼠

       (1) 麻醉成功后以仰卧位固定于手术台,常规备皮、消毒,取颈部正中切口,颈正中切口,钝性分离颈部腺体组织、筋膜,暴露并分离颈总动脉( common carotid artery,CCA)、颈外动脉( external carotid arter,ECA)和颈内动脉( internal carotid artery,ICA)。

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       (2) 分离ICA及其颅外分支翼颚动脉,结扎翼颚动脉,保持CCA的唯yi分支ICA的开放。

       (3) 游离ECA主干,电凝闭塞ECA的分支,结扎远心端并将其离断。在ECA残端用眼科剪剪开一“V”型小口,剪口之前用微动脉夹夹闭CCA和CA。将预处理过(浸泡肝素)的长2cm的4-0线栓小心地从ECA插入。

MCAO线栓

       (4) 去除ICA的微动脉夹后,插入尼龙线栓直至大脑中动脉的起始处,线栓插入17-18mm(见下图)。根据笔者的经验,线栓插入的长度应根据动物体重,如260~280g大鼠,插入深度约17mm,280g以上的大鼠,插入深度约18mm,总之,以遇到轻微的阻力为准,此时线栓正好进入颅内的大脑前动脉,阻塞大脑中动脉的开口。

MCAO线栓法模型操作主要步骤示意图

(a) 在左颈外动脉远端做一切口,将线栓向颈总动脉方向插入,直至分叉口;

(b) 剪断颈外动脉后,将线栓以颈总外/颈内分又口为圆心逆时针旋转180°角,同时结扎翼膠动脉;

(c) 沿着颈内动脉方向进线,当达到15mm时要非常小心,缓慢进线,直至感觉到有轻微阻力为止。

       (5) 若要恢复大脑中动脉的血流,只需把线栓拔出,使头端退到颈外动脉,颈总动脉的血流就可以再灌注到大脑中动脉。

       (6) 结扎消毒后逐层缝合皮下组织和皮肤,等动物麻醉苏醒后放回笼中即可。

       (7) 手术结束后应用激光散斑血流成像仪监测大脑皮层血流,当看到大脑皮层血液血流降低70%~80%,说明模型制备成功。

       (8) 对照手术模型的制作步骤同前,但血管分离后不插入线栓,结扎消毒后缝合皮下组织及皮肤即可。

小鼠

       小鼠MCAO模型的制作与大鼠的基本相同,可不结扎翼颚动脉,而是在进线栓时调整角度小心避开。其他不同之处在于,线栓为5-0到8-0(除5-0外,通常都需要包裹硅胶),长度为15mm。根据动物体重的具体情况,线栓插入颈内动脉(10±0.5)mm即可,保证线栓正好进入颅内的大脑前动脉,阻塞大脑中动脉的开口。

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