邻菲罗啉比色测定低铁数据偏高是为什么？求解答

邻菲啰啉法采用邻菲啰啉分子吸收光谱法测定铁含量，本方法适用于含Fe0.02～20mg/L范围工业循环冷却水中铁含量的测定。

1、方法提要

用抗坏血酸将试样中的三价铁离子还原成二价铁离子，在pH2.5～9时，二价铁离子可与邻菲啰啉生成橙红色络合物，在ZD吸收波长（510nm）处，用分光光度计测其吸光度。本方法采用pH4.5。

2试剂和材料

2.1硫酸；

2.2硫酸铁铵[NH4Fe(SO4)2·12H2O2]；

2.3硫酸：1＋35溶液；

2.4氨水：1＋3溶液；

2.5乙酸—乙酸钠缓冲溶液(pH=4.5)：称取164g乙酸钠，溶于水，加84mL冰乙酸，稀释至1000mL；

2.6抗坏血酸：20g/L溶液；溶解10.0g抗坏血酸于200mL水中，加入0.2g乙二胺四乙酸二钠（EDTA）及8.0mL甲酸，用水稀释至500mL，混匀，贮存于棕色瓶中（有效期一个月）；

2.7邻菲啰啉溶液：2.0g/L；

2.8过硫酸钾溶液：40.0g/L，溶解4.0g过硫酸钾于水中并稀释到100mL，室温下贮存于棕色瓶中，此溶液可稳定放置14d。

2.9铁标准溶液Ⅰ：1mL含有0.100mgFe,称取0.863g硫酸铁铵，精确至0.001g，置于200mL烧杯中，加入100mL水，10.0mL浓硫酸，溶解后全部转移到1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。

2.10铁标准溶液Ⅱ：1mL含有0.010mgFe，取1mL含有0.100mgFe的铁标准溶液Ⅰ稀释10倍，只限当日使用。

3仪器和设备?分光光度计：带有厚度为3㎝的吸收池。

4分析步骤

4.1工作曲线的绘制

分别取0mL（空白），1.00mL，2.00mL，4.00mL，6.00mL，8.00mL，10.00mL铁标准溶液Ⅱ于7个100mL容量瓶中，加水至约40mL，加0.50mL(1＋35)硫酸溶液，调pH接近2(可投加一小块儿刚果红试纸，试纸变蓝pH即为2.5)，加3.0mL抗坏血酸溶液，10.0mL缓冲溶液，5.0mL邻菲啰啉溶液。用水稀释至刻度，摇匀。室温下放置15min，用分光光度计于510nm处，以试剂空白调零测吸光度。以测得的吸光度为纵坐标，相对应的Fe3＋离子量（μg）为横坐标绘制工作曲线。

4.2测定

4.2.1总铁的测定

试样的分解：取5.0～50.0mL水样于100mL锥形中(体积不足50mL的要补水至50mL)，加1.0mL(1＋35)硫酸溶液，加5.0mL过硫酸钾溶液，置于电炉上。缓慢煮沸15min，保持体积不低于20mL，取下冷却至室温，用(1＋3)氨水或(1＋35)硫酸溶液调pH接近(可投加一小块儿刚果红试纸，试纸变蓝pH即为2.5)2，备用。吸光度的测定：将已调好pH值的试料全部转移到100mL容量瓶中，加3.0mL抗坏血酸溶液，10.0mL缓冲溶液（此时刚果红试纸应为红色，若不是红色证明缓冲液有问题，需要重新配置），5.0mL邻菲啰啉溶液，用水稀释至刻度。于室温下放置15min，用分光光度计于510nm处，以试剂空白调零测吸光度。4.2.2可溶性铁的测定?取5.0～50.0mL经中速滤纸过滤后的水样于100mL锥形瓶中，以下按总铁的测定步骤进行。

5分析结果的表述

5.1以mg/LFe2＋表示的试样中总铁含量（ρ1）按下式计算：

p1=m1/V1

m1——从工作曲线上查得的以μg表示的Fe2＋量；V1——移取水样的体积，

5.2以mg/LFe2＋表示的试样中可溶性铁含量（ρ2）按下式计算：

p2=m2/V2

菲罗门色谱柱选择卡

核苷酸专用柱是什么柱？菲罗门为您解答

核酸碱基、核苷和核苷酸的HPLC分析

核苷是由含氮碱基与核糖或脱氧核糖缩合而成，核苷与磷酸合成核苷酸。核苷酸主要参与构成核酸，在人体内广泛分布，具有多种生物学功能，如与能量代谢有关的三磷酸腺苷（ATP）、脱氢辅酶等。

为满足不同物质的分离要求，菲罗门推荐多款色谱柱对其进行HPLC分析。

一、 核苷异构体的分离

1.β-胸苷（dT）与α-胸苷的分离

ACE C18-AR是一种独特的C18键合的HPLC色谱柱，结合了C18烷基链的疏水作用和苯基的芳香选择性，而且可以耐水相，非常适合芳香化合物的分离。

色谱条件：

色谱柱ACE Excel C18-AR 5μ 150 × 4.6 mm

货号：EXL-129-1546U

2.尿苷和阿糖尿苷的分离

ACE C18-Amide是一款嵌入极性酰胺基团的C18柱，相当于同时具备C18与酰胺基的选择性，同样耐水相，很适合分析含氢键给体的物质。

色谱柱：ACE Excel C18-Amide 3μ 100 X 4.6 mm

货号：EXL-1112-1046U

二、 核酸碱基和核苷的分析

ACE HILIC-N是ACE三款亲水作用色谱柱中的中性柱，相对于阴阳离子都显示出较低的离子交换能力，通过极性相互作用、吸附和一定程度的分散（分配能力）来保留分离核酸碱基、核糖核苷和脱氧核糖核苷。

色谱柱：ACE HILIC-N 5μ 150 X 4.6 mm

货号：HILN-5-1546U

三、 核酸碱基、核苷和核苷酸的分析

Titank C18有机硅胶杂化色谱柱，是在硅胶的硅氧网状构造中以更加稳定的烷基来取代在碱性条件下不稳定的硅氧桥连接，具有宽pH耐受范围（1-12）、低背压和水相稳定的特点，对于较大极性的物质有很好的保留。

色谱柱：菲罗门 Titank C18 3μ 50 × 3.0mm

货号：FMB-5559-YONU

四、 单磷酸核苷酸的分离

ACE NH2是氨丙基键合的硅胶柱，与ACE其它固定相的色谱柱一样，都是采用超惰性的硅胶制成，具有很好的稳定性和使用寿命。

色谱柱：ACE Excel 3μ NH2

货号：EXL-1114-1546U

五、 九种核苷酸的分离

Comixshell AIRP是阳离子嵌入烷基键合的核壳硅胶柱，同时具有反相和阴离子交换选择性，是Comix系列色谱柱中的一种。

Comix系列色谱柱可以用来同时检测无机和有机化合物、分离大极性物质及复杂体系。

色谱柱：菲罗门 Comixshell AIRP 2.7μ 150 × 4.6 mm

货号：FMF-AIRP-EONU

总之，不同的疏水性或是极性作用力的固定相可以提供不同的选择性，所以选择正确的固定相是至关重要的一步。