食用油中苯并(a)芘的测定解决方案

       苯并(a)芘又称苯并芘，英文缩写BaP，是碳水化合物、蛋白质和脂肪在不完全燃烧时产生的高活性间接性致癌物质，广泛存在于烟熏、油炸、烧烤、烘焙等食品中。《GB 2762-2017 食品中污染物限量》明确规定，食品中苯并(a)芘限量指标：谷物及其制品不超过5 ppb，肉及肉制品不超过5 ppb，水产动物及其制品不超过5 ppb，油脂及其制品不超过10 ppb。
      《GB 5009.27-2016 食品安全国家标准 食品中苯并(a)芘的测定》规定：试样经过有机溶剂提取，中性氧化铝或分子印迹小柱净化，浓缩至干，乙腈溶解，反相液相色谱分离，荧光检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。
      迪马科技曾发布过植物油、肉制品、水产品、粮谷等基质中苯并芘检测方案，样品净化使用《GB 5009.27-2016》标准中中性氧化铝柱—ProElut BaP，使用者无需中性氧化铝活度调节，可完全重现标准，具有良好的重现性和回收率结果，用户使用后均反映效果良好。
       在此基础上，迪马科技又开发出《GB 5009.27-2016》标准中另一净化技术分子印迹小柱—ProElut BAP-MIP，并应用于食用油中苯并(a)芘的测定，该方法具有：

       1) 对苯并芘专一性的吸附保留，优异的回收率及重现性结果；
       2) 能有效去除油脂干扰，除油效果良好；
       3) 分子印迹小柱规格小，溶剂消耗量少；
       4) 方法操作简单，净化速度快，时间短。

食用油中苯并(a)芘的测定

1、适用范围
       本方法适用于食用油中苯并(a)芘的检测。

2、标准品配制
       标准储备液：准确吸取一定量的500 μg/mL标准储备液(甲苯配)，用乙腈配制成100 μg/L的标准储备液。

3、提取
       取0.4 g样品于玻璃离心管中，加入5 mL正己烷，涡旋混匀，待净化。

4、净化——ProElut BAP-MIP 500 mg/6 mL (Cat#: 65939)
       (1)活化： 依次加入5 mL二氯甲烷，5 mL正己烷，弃去流出液；
       (2)上样： 将待净化液加入柱中，弃去流出液；
       (3)淋洗： 加入6 mL正己烷，弃去流出液；
       (4)洗脱： 加入6 mL二氯甲烷，收集流出液；
       (5)重新溶解： 将流出液在40 ℃水浴下缓慢通入氮气吹干，加0.4 mL乙腈，混匀，4000 rpm离心1 min，取上清，供HPLC分析。

5、HPLC条件
       色谱柱：Diamonsil C18(2)，250 × 4.6 mm，5μm ( Cat#：99603)
       流动相：乙腈：水 = 97：3
       流速：1.0 mL/min
       进样量：20 μL
       柱温：35 ℃
       检测器：荧光Ex：384 nm      Em：406 nm

6、添加回收结果

油中苯并(a)芘检测的添加回收结果(%)

苯并(a)芘标准品（0.5 μg/L）检测的液相色谱图

苯并(a)芘标准品（5 μg/L）检测的液相色谱图

苯并(a)芘标准品（10 μg/L）检测的液相色谱图

添加水平为0.5 μg/kg的大豆油中苯并(a)芘检测的液相色谱图

添加水平为5 μg/kg的大豆油中苯并(a)芘检测的液相色谱图

添加水平为5 μg/kg的大豆油中苯并(a)芘检测的液相色谱图

添加水平为0.5 μg/kg的橄榄油中苯并(a)芘检测的液相色谱图

添加水平为5 μg/kg的橄榄油中苯并(a)芘检测的液相色谱图

添加水平为10 μg/kg的橄榄油中苯并(a)芘检测的液相色谱图

油中苯并(a)芘的测定相关产品信息：

（来源：北京迪科马科技有限公司）

     苯并(a) 芘是一种多环芳香族碳氢化合物，是一种常见的高活性间接致癌物和突变原。在油类作物的生长过程中以及油脂的加工制备过程中都有可能带来苯并(a) 芘，目前食用油生产企业或者食品加工厂都会有食用油中苯并芘测定这一要求。

     目前苯并(a) 芘的测试是参考GB 5009.27-2016中分子印迹的前处理方法，由于不同品牌分子印迹柱质量的差异，方法中建议采用质控样品或者加标回收进行测试，验证其是否满足要求。安谱实验推出大豆油中的苯并(a) 芘质控样，助力油类产品苯并(a) 芘的检测。

●采用质控样进行质控的好处●
 

• 操作简单

• 基体和实际样品更接近，更有助于实验过程中的质量控制

●促销详情●
 

     为了回馈广大用户，现推出100只苯并（a）芘质控样的特价活动。在活动期间，该产品享受5折优惠。另外，凡购买10只以上的客户，该产品还能享受折中折，在5折的基础上，再享受9折的优惠。

活动时间：2020年7月27日-2020年8月8日

*本活动解释权归上海安谱实验科技股份有限公司所有。

前言

       苯并芘又称苯并[α]芘，英文缩写BaP，是一种常见的高活性间接致癌物和突变原。苯并[α]芘释放到大气中以后，总是和大气中各种类型微粒所形成的气溶胶结合在一起，在8微米以下的可吸入尘粒中，吸入肺部的比率较高，经呼吸道吸入肺部，进入肺泡甚至血液，导致肺癌和心血管疾病。

       加压流体萃取技术是近年来发展起来的一种在高温、高压条件下快速处理固体或半固体样品的方法，与常用的索氏提取、超声提取、微波萃取技术等方法相比，具有节省溶剂、快速、回收率高、健康环保、自动化程度高等明显优势。

       本实验参考方法HJ 956-2018，使用莱伯泰科全自动GX快速溶剂萃取系统（Flex-HPSE）提取吸附膜中的苯并[α]芘，SPE1000全自动固相萃取系统净化，M64高通量平行浓缩系统浓缩后用GX液相色谱仪进行检测的一整套方法。实验方法简便、回收率较高且平行性良好，适用于环境空气中苯并[α]芘的检测。

1、仪器与试剂

1.1 Flex-HPSE全自动GX快速溶剂萃取系统（莱伯泰科公司）；

1.2 SPE1000全自动固相萃取系统（莱伯泰科公司）；

1.3 M64高通量平行浓缩系统（莱伯泰科公司）；

1.4 LC600GX液相色谱仪，配有荧光检测器（莱伯泰科公司）；

1.5 苯并[α]芘标准储备液（1000μg / mL，溶剂为乙腈）；

1.6 苯并[α]芘标准中间液 （30μg / mL，溶剂为乙腈）；

1.7 苯并[α]芘标准使用液（3μg / mL，溶剂为乙腈）；

1.8 二氯甲烷（色谱纯）；

1.9 正己烷（色谱纯）；

1.10 乙腈（色谱纯）；

1.11 二氯己烷-正己烷混合溶液：3+7；

1.12 硅胶固相萃取柱（1g/6mL，LabTech）；

1.13 超细石英纤维滤膜

2、环境空气样品处理

2.1 提取

将采样后的滤膜放入快速溶剂萃取罐中，设定萃取温度100℃，压力1500psi（10.34Mpa），静态萃取5min，萃取溶剂为二氯甲烷（1.8），淋洗体积为60%池体积，氮气吹扫60s，循环次数2次，萃取液收集在60mL收集瓶内，具体方法如图1所示。

图1 加速溶剂萃取方法

2.2 浓缩

将收集管直接置于M64中，浓缩温度40℃，开启氮吹针定时跟随功能。浓缩过程中使用正己烷淋洗收集管，Z后置换溶剂为正己烷，样品体积在1mL左右。

2.3 净化

净化过程采用硅胶固相萃取柱净化，具体方法如下：

按照图2方法进行净化实验，其中洗脱溶剂为二氯己烷-正己烷混合溶液（1.11），收集液用M64浓缩至近干，用乙腈定容至1mL，待测。

图2 硅胶固相萃取柱净化方法

2.4 空白加标处理

按2.1方法装填空白滤膜过程中，加0.1mL标准使用液（1.7）至萃取罐中，然后按照2.1~2.3方法进行实验，Z后用乙腈定容至1mL，以此来测定空白加标回收率。

2.5 仪器参考条件

色谱柱：C18 4.6mm*250mm；柱箱温度：30℃；柱流速：1.0mL/min；进样量：20μL；荧光检测器的激发波长/发射波长：305nm/430nm；流动相：乙腈水（8+2）。

3、实验结果

3.1苯并[α]芘标准色谱图

图3 500ng/mL苯并[α]芘标准色谱图

3.2 空白加标色谱图

图4 300ng/mL空白加标色谱图

3.3 标准曲线的建立

分别移取适量苯并[α]芘标准使用液（1.7），用乙腈（1.10）稀释，制备标准系列，质量浓度分别为0.025μg / mL、0.050μg / mL、0.100μg / mL、0.500μg / mL、1.00μg / mL、2.00μg / mL。

将标准系列溶液依次注入GX液相色谱仪，按照仪器参考条件（2.5）检测，得到不同浓度的苯并[α]芘的色谱图。以浓度为横坐标，以其对应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线如下图5所示。

图5 苯并[α]芘标准曲线

3.4 空白加标回收率

表1空白加标回收率

4、结论

由表1可知，GX溶剂萃取-固相萃取-GX液相色谱法测定环境空气中的苯并[α]芘，加标回收率为93.0%~116.6%，RSD为9.6%。本方法测定的加标量为0.3μg，样品无检出。

60mL收集管同时适用于这三种仪器，实验过程中不需要进行液体的转移，能够有效的减少转移过程中造成的损失。

综上所述，GX溶剂萃取-固相萃取-GX液相色谱法测定环境空气中的苯并[α]芘这一实验中，莱伯泰科Flex-HPSE全自动GX快速溶剂萃取系统、SPE1000全自动固相萃取系统和M64高通量平行浓缩系统能够GX、稳定地达到实验的要求，可以提供领域范围内的良好应用。

       苯并(a)芘又称苯并芘，英文缩写BaP，是碳水化合物、蛋白质和脂肪在不完全燃烧时产生的高活性间接性致癌物质，广泛存在于烟熏、油炸、烧烤、烘焙等食品中。《GB 2762-2017 食品中污染物限量》明确规定，食品中苯并(a)芘限量指标：谷物及其制品不超过5 ppb，肉及肉制品不超过5 ppb，水产动物及其制品不超过5 ppb，油脂及其制品不超过10 ppb。

      《GB 5009.27-2016 食品安全国家标准 食品中苯并(a)芘的测定》规定：试样经过有机溶剂提取，中性氧化铝或分子印迹小柱净化，浓缩至干，乙腈溶解，反相液相色谱分离，荧光检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。

方法优势

中性氧化铝柱：ProElut BaP

       迪马科技曾发布过植物油、肉制品、水产品、粮谷等基质中苯并芘检测方案，样品净化使用《GB 5009.27-2016》标准中中性氧化铝柱—ProElut BaP，使用者无需中性氧化铝活度调节，可完全重现标准，具有良好的重现性和回收率结果，用户使用后均反映效果良好。

分子印迹小柱：ProElut BAP-MIP

       在此基础上，迪马科技又开发出《GB 5009.27-2016》标准中另一净化技术分子印迹小柱—ProElut BAP-MIP，并应用于食用油中苯并(a)芘的测定，该方法具有以下优势：

       1)  对苯并芘专一性的吸附保留，优异的回收率及重现性结果；

       2)  能有效去除油脂干扰，除油效果良好；

       3)  分子印迹小柱规格小，溶剂消耗量少；

       4)  方法操作简单，净化速度快，时间短。

       以下为详细解决方案，敬请参考！

食用油中苯并(a)芘的测定

1 适用范围

本方法适用于食用油中苯并(a)芘的检测。

2 标准品配制

标准储备液：准确吸取一定量的500 μg/mL标准储备液(甲苯配)，用乙腈配制成100 μg/L的标准储备液。

3 提取

取0.4 g样品于玻璃离心管中，加入5 mL正己烷，涡旋混匀，待净化。

4 净化

SPE柱： ProElut BAP-MIP 500 mg/6 mL(Cat#: 65939)

(1)活化：依次加入5 mL二氯甲烷、5 mL正己烷，弃去流出液；

(2)上样：将待净化液加入柱中，弃去流出液；

(3)淋洗：加入6 mL正己烷，弃去流出液；

(4)洗脱：加入6 mL二氯甲烷，收集流出液；

(5)重新溶解：将流出液在40 ℃水浴下缓慢通入氮气吹干，加0.4 mL乙腈，混匀，4000 rpm离心1 min，取上清，供HPLC分析。

5 HPLC条件

色谱柱：

Diamonsil C18(2),250 × 4.6 mm,5 μm ( Cat#:99603)

流速：1.0 mL/min   进样量：20 μL   柱温：35 ℃

流动相： 乙腈：水 = 97:3

检测器：荧光  Ex:384 nm      Em:406 nm

6 添加回收结果及色谱图

食用油中苯并(a)芘检测的添加回收结果(%)：

苯并(a)芘标准品(0.5 μg/L)检测的液相色谱图

苯并(a)芘标准品(5 μg/L)检测的液相色谱图

苯并(a)芘标准品(10 μg/L)检测的液相色谱图

添加水平为0.5 μg/kg的橄榄油中苯并(a)芘检测的液相色谱图

添加水平为5 μg/kg的橄榄油中苯并(a)芘检测的液相色谱图

添加水平为10 μg/kg的橄榄油中苯并(a)芘检测的液相色谱图

添加水平为0.5 μg/kg的大豆油中苯并(a)芘检测的液相色谱图

添加水平为5 μg/kg的大豆油中苯并(a)芘检测的液相色谱图

添加水平为10 μg/kg的大豆油中苯并(a)芘检测的液相色谱图

7 相关产品信息

民以食为天，食以“油”为先，一日三餐，煎炒炸卤炖，都离不开食用油。食用油不仅可以为菜肴增味添香，还是人体所需脂肪酸的重要来源。随着全国餐饮消费市场回暖，对食用油的需求更是激增，食用油的安全也成为了人们经常谈论的话题之一。食用油中如果含有一些重金属元素，如金属元素砷(As)，铅(Pb)，镉(Cd)，铬(Cr)等，会严重影响消费者的健康。

当分析食用油中十几种或二十几种元素时，可以使用电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)。当只有几个重金属元素要进行分析时，优先选择石墨炉原子吸收法。它简单易学习，能更快的建立方法，使用起来也比电感耦合等离子体质谱简单。

本文报道的方法是采用石墨炉原子吸收法直接分析食用油样品而不需要消化的一种方法，对食用油中的砷、铅和镉进行了分析。使用这种方法的优点包括需要的样本量小，直接引进样本，灵敏度高，分析速度快。

实验条件

仪器

测量使用珀金埃尔默PinAAcle™ 900T原子吸收光谱仪，配以AS900石墨炉自动进样器，以及用于原子吸收的直观的WinLab™32软件。

珀金埃尔默PinAAcle™ 900T原子吸收分光光度计配以AS900石墨炉自动进样器。

珀金埃尔默 PinAAcle 900T具有高效的,真正意义的双光束光学系统和固态检测器，从而提供卓 越的性噪比。

标准和样品的制备

珀金埃尔默公司用于铅、镉和砷测定的单元素标准物质（序列货号分别为As: N9300180;Pb: N9300175;Cd:N9300176）作为标准储备液用来制备工作曲线同时用作质量控制检查标准。5种食用油（棕榈，芝麻，向日葵，大豆和米糠）均从当地的超市购买，且没有做任何预处理。在未知样品分析之前，先做一条包含五个点的校准曲线（四个标准点和一个空白点），每一个样品都使用异丙醇（IPA）配制。所有的食用油样品均在聚丙烯瓶（货号：B0193234）中用异丙醇稀释20倍（体积比）。

结果和讨论

对于铅和镉这两种元素来说，所有油的浓度均低于检出限，大豆油的砷检测浓度为4.28μg/L，其余食用油的砷浓度也都低于检出限。

直接进样测定食用油中的As，Pb，和Cd的标准曲线

结论

本文建立了直接进样法定量分析食用油样品中的有毒元素。

采用横向加热石墨炉原子化器技术，通过减少样品前处理消耗的时间，使分析的准确度和对样品的分析能力都大大提高。独特的光学系统，固态检测器( 在低波长检测时是非常有效的)，横向加热石墨炉原子化器技术(THGA)，恒温平台石墨炉(STPF)技术和纵向塞曼背景校正，所有这些技术有助于PinAAcle 900T分光光度计在分析像食用油这类复杂基质样品时能够提供高准确度、快速和可重复性的检测结果。

   近几年来，地沟油的概念常见于新闻报道，一时间，各种鉴定地沟油的方法逐渐开展起来，近日国家食药总局就发布了《食用油脂中辣椒素的测定》食品补充检验方法的公告（2018 年第26 号）；作为一种鉴别地沟油的方法, 安谱实验及时跟进，根据该补充方法，使用CNW HC-C18 的柱子，用于食用油基质的净化，三种辣椒素：合成辣椒素，天然辣椒素 ，二氢辣椒素的5ppb 添加回收率分别为 65%，82%，61%；RSD 分别为2.9%，2.5%，3.7%，回收率稳定，平行性良好。

食用油中溶剂残留限量值是多少？

参考标准：《全国土壤污染状况详查土壤样品分析测试方法技术规定》和《ISO 13913-2014 土壤中邻苯二甲酸酯类的测定 GC/MS法》

邻苯二甲酸酯（PAEs）是一类具有环境内分泌干扰作用的有机污染物，具有致畸性、致癌性、致突变性及生殖毒性的特点。主要来源于人工合成，可通过各种途径进入环境，广泛存在于大气、水体、土壤、沉积物、灰尘等环境介质中，日用消费品中也普遍含有。邻苯二甲酸酯的大量使用所带来的环境污染和人体健康问题已经引起了人们广泛的关注。

方法优势
        迪马科技技术实验室参考《全国土壤污染状况详查土壤样品分析测试方法技术规定》和《ISO 13913-2014 土壤中邻苯二甲酸酯类的测定 GC/MS法》建立了土壤中17种PAEs的测定方法，该方法：
(1) 采用乙酸乙酯提取，ProElut AL-B玻璃固相萃取柱净化，GC-MS检测；
(2) 可有效去除土壤中的矿物质，水分和腐殖质等多种杂质，实现优异的净化效果；
(3) 具有前处理简单，回收率高，除杂效果明显、方法重现性好等优点。

土壤中17种邻苯二甲酸酯(PAEs)的测定——GC/MS法

1、适用范围
        本方案适用于土壤中DMP、DEP、DAP、DIBP、DBP、DMEP、BMPP、DEEP、DPP、DHXP、BBP、DBEP、DCHP、DEHP、邻苯二甲酸二苯酯、DNOP和DNP的检测。

2、标准品配制
单标标准储备液：准确称取各标准品，用乙酸乙酯配制成1000 μg/mL的单标标准储备液。
混合标准储备液：分别吸取各单标标准储备液，用乙酸乙酯配制成10 μg/mL（DBP为6 μg/mL）的混合标准储备液。

3、提取
        取5 g样品，加入适量无水硫酸钠(一般样品加8-10 g)，搅拌均匀，加入20 mL乙酸乙酯，振荡30 min，静置5 min，收集3 mL上层清液，待净化。

4、净化—— ProElut AL-B 1000 mg/6 mL Glass（Cat.# 65206G）
(1)活    化： 向柱中加入6 mL乙酸乙酯，弃去流出液；
(2)上    样： 将待净化液加入柱中，控制流速1滴/秒，收集后1 mL流出液，供GC/MS分析。

5、色谱条件
色谱柱：DM-5MS, 30 m × 0.32 mm × 0.25 μm (Cat.# 8231)
进样口温度：280 ℃
升温程序：初始温度60 ℃，保持1 min，以20 ℃/min升温至220 ℃，保持1 min，再以5 ℃/min升温至300 ℃，保持5 min
载气：氦气，柱流速：2.69 mL/min
进样方式：不分流进样
进样量：1.0 μL
离子源温度：230 ℃
接口温度：280 ℃
溶剂延迟：5.5 min
电子轰击电离源（EI）：选择离子监测模式（SIM），分组监测见表1

表1 选择离子监测组表

6、添加回收结果
添加水平为0.1 mg/kg土壤中17种PAEs的GC/MS检测添加回收结果

17种PAEs标准（DBP 6 μg/mL、其它10 μg/mL）TIC图

土壤中17种邻苯二甲酸酯(PAEs)的测定——GC/MS法相关产品信息

       食用油是指在制作食品过程中使用的动物或者植物油脂，由于原料来源、加工工艺以及品质等原因，常见的食用油主要是植物油。食用油品类繁多，是国民生活的必需品，随着经济发展和人们生活水平的提高，食用油的消费量呈现稳步上升的趋势。而随着大众对健康关注程度的持续攀升，关于食用油的品质、营养价值以及质量安全问题受到越来越多的关注。

       食用油食品安全的要求日趋严格，而对于检测技术的要求也越来越高。那么在食用油质量监督检测中，全自动电位滴定仪又有哪些作用呢？

       食用油是由三分子脂肪与一分子甘油酸化而成的甘油酯，很多食用油富含不饱和脂肪酸，不饱和脂肪酸在某些环境作用下，极易被过氧化物氧化造成油脂酸败，储存困难。所以，酸价、过氧化值直接反应了食用油Z初的氧化程度的标志。酸价、过氧化值是判定食用油是否达到国家卫生要求的Z常用标准。

       根据《GB 5009.227-2016食品安全 国家标准》，在这项标准中明确指出对电位滴定仪的要求是：具有PH校正功能 和动态滴定模式，信号精度0.1mV且能实时显示滴定曲线和一阶微分曲线，具备20mL计量管、防扩散滴定头以及对应的电极。根据标准要求可以选用CT-1Plus多功能电位滴定仪并按照国标的方法进行样品分析测试。