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- CH68453622 2017-01-18 00:00:00
- 合成DNA本身不贵,但是技术要求高过程复杂,不好估算。 DNA的生物合成有两种: (1)生物体内DNA 的自我复制 (2)某些有逆转录酶的病毒,如HIV寄生在宿主细胞后通过逆转录获得DNA. DNA 的人工合成也有两种: (1)以DNA复制为原理的多聚酶链式反应,PCR技术,实现体外的DNA扩增(注意是扩增,而不是从无到有,首先是有一个DNA分子提供模版的); (2)用DNA合成仪,从无到有的生成一些小分子的DNA(这要求已知DNA的碱基排列顺序,然后将顺序输入到合成仪中,再在仪器内添加相关合成条件,如原料,酶等) DNA复制和PCR扩增的区别: (1)原理一样,都需要模版,都遵循碱基互补配对原则; (2)各步骤具体条件有一定差异. 解旋:体内DNA复制,需解旋酶和ATP,有模版DNA; PCR没有使用解旋酶,而是通过高温(90~95℃)使氢键打开DNA模版链解旋,也没有加入 ATP; 子链的生成:体内需RNA引物,DNA聚合酶,四种游离的脱氧核糖核苷酸(dAMP、dGMP、 dCMP、dTMP),ATP等; PVR也需引物,不过有RNA也有用DNA的,将解旋时的高温将至55~60℃使引物和模版结合,再加热至70~75℃,耐高温(热稳定)的DNA聚合酶(Taq酶)从引物起始进行互补链的合成,四种游离的脱氧核糖核苷酸作原料(dATP、dGTP、dCTP、dTTP,注意,这些原料具有高能磷酸键可以供能).
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