pcr会合成目的基因以外的产物吗

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  十几年x 2017-11-03 00:00:00

  PCR技术基本原理 类似于DNA 复制程其特异性依赖于与靶序列两端互补寡核苷酸引物 PCR种体外DNA 扩增技术模板DNA、引物4种脱氧核苷酸存条件依赖于DNA聚合酶酶促合反应待扩增DNA片段与其两侧互补寡核苷酸链引物经高温变性——低温退火——引物延伸三步反应循环使DNA片段数量呈指数增加短间内获我所需量特定基片段 PCR扩增仪 环境检测靶核酸序列往往存于—复杂混合物细胞提取液且含量低于探测种复杂群体特异微物或某基杂交显敏使用PCR技术靶序列放几数量级再用探针杂交探测扩增序列作定性或定量研究析微物群体结构PCR技术与其技术结合起使用 RT-PCR、竞争PCR、巢式PCR、RAPf)、ARDRA等 类别 听语音 竞争性PCR种定量PCR通向PCR反应体系加入工构建带突变竞争模板、控制竞争模板浓度确定目模板浓度目模板作定量研究 PCR技术限制酶切技术结合使用用限制酶酶切目基PCR扩增产物通酶切产物析探测该基态性 RAPD(randomly amplified polymorphic DNA， RAPD)应用比较广泛项技术RAPD用些某—特定基非特异性引物扩增某些片段RAPD析用于探测含混合微物种群各种物反应器微物性用RAPD析所基组指纹图谱比较段间内微物种群变化及比较试规模试规模反应器面用足用估测群落物性 步骤 听语音 PCR由变性--退火--延伸三基本反应步骤构： 模板DNA变性 模板DNA经加 热至93℃左右定间使模板DNA双链或经PCR扩增形双链DNA解离使单链便与引物结合轮反应作准备； 模板DNA与引 物退火(复性) 模板DNA经加热变性单链温度降至55℃左右引物与模板DNA单链互补序列配结合； 引物延伸 DNA模板--引物结合 物TaqDNA聚合酶作用dNTP反应原料靶序列模板按碱基配与半保留复制原理合条新与模板DNA 链互补半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三程获更半保留复制链且种新链循环模板每完循环需 2～4钟2～3能待扩目基扩增放几百万倍达平台期(Plateau)所需循环数取决于品模板拷贝

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