Taq酶你选对了吗？

导读

目前国内市场上销售的热启动Taq酶的品牌很多，但真正高质量的热启动Taq酶并不多，面对这么多的热启动Taq酶产品，我们应如何选择？

首先，选择扩增效率高的热启动Taq酶

耐受性好的Taq酶反应体系经优化后，扩增效率在95%以上，即使是在目标基因含量较低时也能够获得满意的扩增，在模板量较高时，也不易中毒，指数扩增期较长。耐受性能较差的Taq酶，即使反应体系经多次优化，扩增效率仍达不到90%，扩增曲线“S”型不明显，斜率较小，曲线低平。模板量较低时扩增不出来，较高时扩增效果也不理想。所以PCR扩增效率与Taq酶的性能密切相关，选择高扩增效率的DNA聚合酶对PCR、qPCR能否成功至关重要。

其次，选择酶动力强的热启动Taq酶

Taq酶的酶动力与扩增效率有关。一般热启动Taq酶的酶动力越强，PCR扩增的指数增长期越长，‘S型’曲线更加典型，荧光信号值更高，而且更适合做多重PCR检测。酶动力弱的品牌DNA聚合酶一般只能支持2重反应，在做3重反应时，扩增曲线低矮，荧光信号值较低，无典型扩增曲线，结果很难判定。

zuihou，选择灵敏度高的热启动Taq酶

一般说，DNA聚合酶的扩增效率高，灵敏度就高，但也有不一致的情况。如果要扩增的样本目标基因丰度较低，建议对Taq酶的扩增灵敏度进行检测。

Taq酶的扩增灵敏度进行检测，常见的检测方法是将目标基因质粒片段进行10倍或5倍梯度稀释，在较低的几个稀释度进行PCR检测，选择检测灵敏度较高的热启动Taq酶。

由此可见，研究者需根据自己的实验要求和经费情况进行选择，做一个梯度稀释扩增实验，以检测热启动Taq酶的扩增效率和灵敏度。

Cielo™实时荧光定量PCR系统

Harness of the power of qPCR

▌12列温度梯度设置：多温度梯度设置，快速优化条件，确定合适退火温度。

▌良好的S型扩增曲线。

▌熔解曲线单峰，无杂峰。

除此之外， Cielo™实时荧光定量PCR系统融合了高品质Peltier温度模块和基于光纤传输的光学检测系统，可为您的科学研究就提供高精准、高灵敏可靠结果。

       作为实验室常用仪器，各种隔膜真空泵大同小异，要选一款符合实际所需的隔膜真空泵，购买前应多做功课。您需要了解这些情况：

     1.隔膜真空泵的性能指标

　　隔膜真空泵的主要指标有两个:极限抽气速率和极限压力(也称Jue对真空度),极限抽气速率的大小可以判定,其所能应用的被抽气装置的容量大小,极限压力决定了隔膜真空泵所能达到的极限Jue对真空度. ( 注:Jue对真空度与表压真空度有对应关系,但Jue对真空度不会因为地理位置的改变,大气压力的改变而发生变化,而表压真空度则充满不确定性.建议使用Jue对真空度压力显示.)　

　　2.耐腐蚀性能

      优秀的隔膜真空泵可应用在大多数实验场景,拥有优秀的耐腐蚀性能.不管是隔膜/阀片/管路等与气体接触部分,都做了特殊处理。

　　3.连续运行性能稳定

       多数的隔膜真空泵在连续运行后,发热严重,没有配置散热装置,同时真空度波动较大。

       郑州博汇精密科技有限公司生产的DP系列隔膜真空泵可长时间运行,性能稳定,具有高度的耐腐蚀性能。

推出的隔膜真空泵DP-630G,压力显示采用数显表,显示隔膜真空泵的jue对真空度和当前大气压值,方便用户做数据记录。

　　如果需要，请联系我们！

93个与仪器及检测相关国家标准在今年8月份实施，其中，涉及食品安全的相关标准多达40多项。这其中绝大部分是GB1886系列关于食品添加剂的相关标准。

作为前处理样品浓缩的常规仪器，旋转蒸发仪必不可少。“工欲善其事，必先利其器”，那么问题来了，如何选择一台好的旋蒸？让英诺德来帮助您！

                    INNOTEG-ScienceOne Vap Smart

01转速范围  5-280 rpm

02加热锅温度范围  室温-180℃, 水/油浴通用

03快速升温  加热锅下窄上宽的设计，有利于加热介质的快速升温，缩短加热时间

04避免误操作  加热锅操作面板带锁定功能键，可有效避免误操作

05高蒸馏效率  三重冷凝盘管回路设计，可有效提高蒸馏效率

06可定时  可进行定时设定，省心省力

07智能马达  马达自动升降蒸发瓶

08均匀加热  仪器可进行正反转，尤其适合于需要进行干燥的粉末样品

09保护样品  意外断电后，仪器会自动抬升蒸发瓶，避免样品受热损害

选对了旋蒸， 那么如何让优秀的设备展现出优异的性能呢？请收下我们为你专门准备的维护指南！

好消息是：INNOTEG-ScienceOne Vap Smart旋蒸无需特别的维护，就是这么棒！

但实验前的检查和准备工作不可忽视。


做好以下这几点，让Vap Smart展现优异性能！

请务必定期地进行常规检查玻璃冷凝管上的密封圈，如有需要，请及时更换

清洁仪器须断开电源！

请使用含表面活性剂的清洁剂或者使用异丙醇清洁惰性污渍

升降系统，操作前请常规检查升降系统！

长时间未使用(约4周)时，开启蒸馏前须通过马达使升降系统在最低点和最高点位置来回升降几次

注意避免沸腾延迟！在仪器没有开启旋转情况下，请勿加热蒸发瓶！突然出现泡沫或者出现气体则说明蒸发瓶内介质开始分解，请立即关闭加热并将蒸发瓶提升至加热锅以上位置，保持周边危险区域通风良好，并提醒周边人员

当仪器关闭或者电源中断时，升降系统将会提升蒸发瓶至加热锅以上位置

进行蒸馏前，请必须确保断电后升降系统可提起玻璃组件和样品

来自美国Azure Biosystems公司的Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统，融合了高品质Pilter温度模块和基于光纤传输的光学检测系统，为您的科学研究提供高jing准、高灵敏的可靠结果。北京深蓝云生物科技有限公司已经为您准备好了仪器，期待您的SY哦~

既然仪器已经备好了，那么该怎样选择检测方法呢？

众所周知，qPCR依托于荧光检测技术，通过使用DNA结合染料、荧光PCR引物或探针等实时监测目的基因的扩增，从而对目的基因进行定量分析。为了避免在实验时出差错，下面就跟着小编一起来看一下常用的经典方法吧~

1、 DNA结合染料—SYBR Green I 法

•  原理：SYBR Green I 是一种DNA结合染料，其与双链DNA结合后，荧光大大增强，DNA与染料结合所释放的荧光量与dsDNA的数量成正比。因此，检测到的荧光信号可反映出PCR体系存在的双链DNA数量。

•  特征：可逆荧光，Z大吸收波长497nm，Z大发射波长520nm。

•  适用情况：非特异性的荧光染料，不能识别特定的双链，只要是双链（包括非特异性扩增产物、引物二聚体等）就会结合发光，在临床上使用可能会有假阳性发生。但该方法容易建立实验体系，可进行熔点分析，通用性好，价格相对较低，在科研中使用比较普遍。

2 、TaqMan 探针法

•  原理：检测时除了需要一对特异性引物外，还需要一条与靶序列互补配对的寡核苷酸链—TaqMan探针，其5’末端包含荧光报告基团R，3’末端为淬灭基团Q。当探针与靶序列互补配对时，荧光基团发射的荧光因与3’端的淬灭基团接近而淬灭。在进行延伸反应时，聚合酶的5’核酸外切酶活性将探针切断，使得荧光基团与淬灭剂分离，发射荧光。荧光信号和产物的量相匹配。

•  特征：检测到的是积累荧光，随着循环数的增加，释放出来的荧光基团不断积累。

•  适用情况：特异性较强，可进行多重qPCR分析，但成本较染料法要高一些，实验构建相对复杂。常用的荧光基团推荐：FAM、VIC、HEX、CY5等。

3 、分子信标(molecular beacon)

•  原理：分子信标方法在检测时除了需要一对引物以外，还需要一条呈发夹结构的寡核苷酸探针（25-40nt），分子信标的 5'端附有荧光报告基团，3'端附有淬灭基团，环被设计成与靶序列互补的15–30核苷酸，其两端各有5-7个核苷酸互补形成茎结构，将报告基团与淬灭基团连接到一起。发夹结构中，由于报告基团接近淬灭基团，监测不到荧光信号，当环的部分与核酸序列互补配对，分子信标打开成链状，使得荧光基团与淬灭剂分开，发射荧光。

•  特征：茎环结构，也是积累荧光。

•  适用情况：高特异性、可以用于多重反应，适合区分等位基因。但不能做熔点分析；发夹的茎结合过强过弱都不合适，过强的话，信标不能与靶标正确杂交，过弱的话，会随机折叠成非发夹结构，导致产生杂信号。常用的荧光基团有FAM 、Texas Red等。

4  、荧光共振能量传递(FRET)

•  原理：FRET探针又称双杂交探针，由两条相邻探针组成。一个探针3'端带有供体基团，第二个探针的5'端带有受体基团，在PCR反应的退火步骤，两条探针头尾相连地分别杂交在靶标序列上，荧光分子接近，从供体到受体产生荧光共振能量传递，受体荧光信号的增加与扩增子出现的量成比例。

•  特征：由于FRET探针是靠近发光，所以检测信号是实时信号，而非积累荧光。

•  适用情况：除引物外需要设计两条探针，通用性不高；需挑选合适的供体及受体基团，供体基团发射波长与受体基团的激发波长需显著重叠，而供体基团发射波长与受体基团的发射波长要明显分离。可做熔点分析，特异性较强。

5 、 LUX Primers

•  原理：LUX (light upon extention) 引物是通过荧光标记的引物，使引物可以实现探针的功能。其原理和分子信标类似，LUX引物也是发夹结构，其中一条引物3’端用荧光报告基团标记。在没有单链模板的情况下，该引物自身配对，形成发夹结构，使荧光淬灭。在模板存在的情况下，引物与模板配对，发夹结构打开，产生荧光信号。

•  特征：积累荧光；不需要额外设计探针。

•  适用情况：不能进行熔点分析，通用性比不上SYBR Green I。但不需要专门设计探针，同时不会受非特异性扩增产物和引物二聚体的影响，特异性较SYBR Green I强。

【以上内容来源于网络整理，侵删】

看完了上面关于经典qPCR检测方法的介绍，您是不是有想去跑一轮qPCR的冲动呢？

美国Azure Biosystems公司的Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统，提供Azure Cielo-3通道和Azure Cielo-6通道，可根据实验需求灵活配置。

☑   数据可靠性: 连续1000次实验后，结果高度一致，温控jing准，性能稳定可靠。

☑  应用灵活性: 提供多种qPCR应用分析，定制化报告。

☑   流程智能化: 中英文用户界面，触控操作，可多机联用。

☑   交互灵活性: 主机可独立运行qPCR程序，电脑、Wi-Fi、网络交互。

灭菌程序你选对了吗？

需要大量培养样品时，灭菌是实验里不可缺少的环节。TOMY灭菌锅为客户提供了多种可以选择的程序，怎么选才能更好地提升实验效率呢？还有意想不到的功能等着你~

液体灭菌过程

以常用的LB培养基为例，在蓝盖瓶中倒入配置好、调好pH的培养基后，我们需要选择液体灭菌功能，通常液体灭菌所花费的时间更长。

因为我们将液体灭菌时的排气、制冷速度设为0，为什么要这样设置呢？

不知道有没有小伙伴遇到过这样的情况：急用培养基，但是从刚灭菌锅里拿出来温度太高无法使用，就把蓝盖瓶放进冷水里试图降温。此时此刻，只听见“啪”的一声，这一瓶培养基算是报废了，还损失了一个瓶子。这种现象叫做暴沸，因此在液体灭菌时我们要避免温度骤然下降。

正常灭菌过程

当灭菌的物品主要是固体，如蓝盖瓶、锥形瓶、培养皿、涂布棒和枪头等，此时我们可以选择正常灭菌过程，排气速度和降温速度都会比液体灭菌要快很多。

灭菌保温过程

这个功能对于灭菌后没有时间及时取出的小伙伴非常友好。加了琼脂的培养基，在灭菌完成后后可以放在TOMY灭菌锅里保温。(长按FUNCTION可以手动按需调节保温时间)

加热保温过程

烘箱放满了怎么办？TOMY灭菌锅的这个功能可能很少有人知道，可以将培养基溶解并保温。在此方案下，灭菌锅将会先加热溶解培养基，然后进入保温程序。(长按FUNCTION可以手动按需调节保温时间)

正确地选择灭菌程序

~提高实验效率的同时也是对仪器的养护~

徕卡LSR 武素芳
锂电池是最成功的商业化电化学产品，广泛应用于电子产品，电器，网格存储，汽车，发电站等生活的各个方面。然而，锂电池还有很多的性能需要改善，例如能量密度，循环能力，存储能力，安全性等等，正因如此，我们需要了解电池的内部结构。 
  
     锂电池的内部结构非常复杂，为了改进性能，可以用多种表征手段来揭示电池内部的充放电行为，锂电池内部的结构改变有多个维度，包括原子级晶体结构的改变，固态电解质界面（SEI）生长，微米级电极颗粒破碎，宏观上电池膨胀等，这些变化都会影响电化学性能，成像技术给出的锂电池的2D或3D的空间分辨率，可以帮助研究人员分析失败机理，提高锂电池实际使用性能。
比如，在“锂电池中电极材料裂纹结构制备及其电化学性能研究”②中，作者将NCM材料（三元正极材料）作为研究对象，即含有Li、Ni、Co、Mn和O的材料，用徕卡三离子束切割仪EM TIC3X切割材料粉末，看内部裂纹结构（图1）。
 
图1.NCM不同压实密度内部孔道分布及结构示意图
 
电子束成像技术（EM）目前来说是锂电池成像里使用最多的。电子束德布意耳波长小于10-10m，主要是样品和电子束相互作用激发一系列的X-射线，电子信号。电镜成像可以到达原子级别，可以轻松获得元素分布图，化学价位分析和3D重构。电镜分辨率可达0.05nm,可以很容易揭示锂电池原子级的催化和储能的机理。
但是电镜也有自身限制：
1）电子束工作需要高真空，不利于电解液的研究；
2）电子束和轻质元素相互作用弱，不太容易获得锂离子；
3）透射电子束对电极材料的穿透深度一般在10-6m，当锂电池电极颗粒大于10-5m时，则不太合适；
4）高能电子束可能会损伤样品。但这里有其他的解决方案，原位电镜，冷冻电镜，3D重构。
    冷冻电镜首先是应用在生物大分子中，最大优点是保持样品的结构真实性。此方法的发明者们在2017年获得了诺贝尔化学奖。这项技术在固态电池研究中，可直观看到锂枝晶的形成，SEI的结构，还有在样品制备和电子束辐照中容易受影响的部分。和传统的电镜技术相对比，冷冻电镜有两个显著特点：低温，低电压。在样品准备，转移和测试过程中，都需要在极低的温度(−170 °C)下进行，样品的脆弱结构被冻住并得到保存，同时，冷冻电镜测试中电子束强度远低于常规电镜，减少了样品的损伤。①
    近年来，徕卡电镜制样设备为锂电池材料内部结构研究提供助力，在国内外多个头部锂电池材料高校研究所，企业实验室检测部门，都有徕卡制样的身影。
  
徕卡电镜制样产品全家福
 
在接下来的内容中，我们会先后介绍徕卡制样设备在正极材料，负极材料，隔膜材料，固态电池等方面案例。
 
 在“钴酸锂双晶界裂纹降解的原子机理”一文中，作者使用徕卡EM TIC 3X做截面切割后，采用EBSD统计钴酸锂，孪晶比例超过40%。孪晶界是一种缺陷，在晶界处容易产生裂纹，主要包括解理裂纹和分解裂纹。文章里面对这两种裂纹的形核和生长机制做了详细的分析。③
 
图2.孪晶界的EBSD图示及晶向
 
 
在“钴酸锂多元素掺杂方法极大提高其电化学性能”一文中，作者采用徕卡三离子束EM TIC 3X切割循环后的极片，并作SEM形貌分析④
 
图3.循环后极片的离子束切割SEM图片示意图
 
在“纳米结构和开孔颗粒形态对锂离子电池的电极加工及电化学性能”一文中，作者采用徕卡三离子束EM TIC 3X切割不同孔隙度极片，并作电镜观察及EDS分析：⑤
 
图4.离子切割压延电极的扫描电镜图片
 
为什么说徕卡三离子束设备适合正极材料的加工呢？这和它的功能和设计是分不开的。
徕卡三离子束设备EM TIC 3X可以常温，可以冷冻，也可以真空传输或冷冻传输，根据加工需要，可随时随地升级变身新功能。
在锂电池正极材料看平整断面时，通常使用常温加工，标准样品台即可满足通常需要；
若测试样品数量多，则可选择三样品台，一次放三个样品，到预设定时间后，取出即可；
若样品中锂及其化合物含量高，短时间也不可以接触空气，或高镍正极材料，不能短时间接触空气，则可选择真空传输，全程真空装载加工样品，且加工完毕可真空转移至电镜中实现最终观察。
 
图5.徕卡三离子束设备EM TIC 3X结构及样品台功能选项示意图
徕卡三离子束设备采用鞍型场枪设计，对于正极材料非常友好，鞍型场枪能量分散，对于一个点，热量低，特别适合掺杂不耐热样品或循环对比实验。循环实验中，使用后的电极中往往会掺入部分有机物，此时的低热加工，对样品来说再合适不过。此类枪由于设计时没有磁场的引入，对于电池材料的粉体原料或电极的掉粉问题，不会产生吸附现象，极大延长了枪的维护周期。
 
 
如果您需要了解此设备的信息或者需要了解样品制备方法，无论是电池哪一部分，均可随时跟我们联系并作交流。
 
参考文献：
[1] Zhe Deng, Xing Lin, Zhenyu Huang, Jintao Meng, Yun Zhong, Guangting Ma, Yu Zhou, Yue Shen, Han Ding, and Yunhui Huang. Recent Progress on Advanced Imaging Techniques for Lithium-Ion Batteries. Adv. Energy Mater. 2021, 11, 2000806
[2] Performance Guangxin Li, Ya Wen, BinBin Chu, Longzhen You, Lingfeng Xue, Xiang Chen,
Tao Huang, and Aishui Yu. Comparative Studies of Polycrystal and Single-Crystal
LiNi0.6Co0.2Mn0.2O2 in Terms of Physical and Electrochemical Performance. ACS Sustainable
Chem. Eng. 2021, 9, 11748−11757
[3] Yuyuan Jiang, Pengfei Yan, Mingchao Yu, Jianming Li, Hang Jiao, Bo Zhou, Manling Sui.
Atomistic mechanism of cracking degradation at twin boundary of LiCoO2. Nano Energy 78
(2020) 105364
[4] Xing-Qun Liao, Pan-Li Ren, Chang-Ming Zhang, Zhou-Lan Yin, Guo,Cong Liu and Jin-Gang Yu. Highly improved electrochemical performances of LiCoO2 via a multi-element co-doping strategy. New J. Chem., 2021, 45, 5596.
[5] Marcus Müller, Luca Schneider, Nicole Bohn, Joachim R. Binder, and Werner Bauer. Effect of Nanostructured and Open-Porous Particle Morphology on Electrode Processing and Electrochemical Performance of Li-Ion Batteries. ACS Appl. Energy Mater. 2021, 4, 1993−2003

相关产品：徕卡三离子束EM TIC 3X
了解更多徕卡电镜制样的信息：https://www.leica-microsystems.com.cn/cn/products/electron-microscope-sample-preparation/

【锂电池电镜制样方法专题】
锂电池材料的内部结构研究手段，你选对了吗？（二）
--- 锂电池隔膜基础篇
作者：包沈源
 
图1 锂电池结构示意图
最初，锂电池正极(cathode)材料为钴酸锂，负极(anode)则是聚乙炔。随后在1985年，根据Kenichi Fukui的前沿电子理论，研究者们使用钴酸锂和石墨作为正极和负极，以提升锂电池的稳定性。然而，在锂电池量产前，首先需要解决电池过热和过载的安全问题，而其中的关键点就在于隔膜(separator)。
电池隔膜是放置在电池正极和负极之间的一种渗透膜（图1），其主要作用是保持正极和负极分离，防止电池短路，同时隔膜也需要允许电荷载流子通过，以保证化学电池电路闭合。隔膜通常是一种具有微孔的聚合物膜，需要对电解液和电极材料具有一定的化学和电化学稳定性，同时也需要有足够的机械强度以承受电池组装过程中的应力。
Yoshino开发了微孔聚乙烯隔膜，以实现“保险丝”的功能。在电池内部异常过热情况下，隔膜提供了一个关闭机制：微孔受热融化闭合，阻断电池内部载流子流动。在2004年，Denton及其同事研发了一种新型电活性聚合物隔膜，其具有过载保护功能，能够通过控制载流子电位，可逆地切换绝缘和导体状态。
不同于其他技术，聚合物隔膜最初并非特意为电池而开发，由于该材料是当时技术淘汰下来的产品，因此能够低成本大批量生产。隔膜材料包括非纺织的纤维材料：棉花、尼龙、聚酯、玻璃等；聚合物薄膜：聚乙烯、聚丙烯、聚四氟乙烯、聚氯乙烯；陶瓷；天然材料：橡胶、石棉、木材。
目前应用于电池隔膜的大部分聚合物都是半晶状聚烯烃材料，包括聚乙烯、聚丙烯及其混合物。近期，研究者们尝试使用接枝聚合物来改善电池性能，其中包括：微孔聚甲基丙烯酸甲酯和硅氧烷接枝聚乙烯隔膜，相比于传统的聚乙烯隔膜他们展现出更好的表面形貌和电化学性能。另外，聚偏二氟乙烯纳米纤维网被应用于隔膜材料，可以同时改善离子导电和形貌稳定性。
 
图2 Leica EM TIC3X三离子束研磨仪，配置冷冻切割样品台
 
对于使用电子显微镜观察锂电池隔膜形貌，分析其化学成分的表征，正确的电镜制样方法是决定最后结果准确性和真实性的关键步骤。由于目前使用的锂电池隔膜基材多为高分子聚合物材料，并且表面大多经过无机物或者有机物修饰。对于处理这种对温度及其敏感，并且具有复杂的多层结构的样品，需要注意整个样品制备过程中可能引起的热损伤和应力损伤。Leica EM TIC3X冷冻离子束切割技术是目前解决上述问题的最优方案之一(图2)。其主要得益于EM TIC3X以下特点：

• Leica TIC3X独特的鞍形场散焦离子源，能够大幅度降低甚至避免离子束切割过程中，对样品造成的热损伤，展现出最真实的表面形貌结构

• Leica TIC3X配置的冷冻切割样品台及其主动式液氮泵，能够实现大范围、精准温控(30°C ~ -160°C)，保证样品加工过程的温度，有效抑制热损伤的产生

• Leica TIC3X冷冻切割样品台配有体视显微镜，能够通过三轴精确调节样品位置，方便用户进行精准定位，并在加工过程中实时确定样品状况，及时调整加工参数

 
图3 (a)和(b)，以及(c)和(d)分别为Leica EM TIC3X常温以及冷冻离子束切割所得的锂电池隔膜截面SEM图像
 
如图3所示，我们尝试使用常温和冷冻离子束切割，加工隔膜样品，以分析温度对于该类样品的影响。如图3(a)和(b)所示，尽管使用较低的加速电压(4kV)，并在加工过程中增加休息时间，辅助样品散热，但是最后隔膜表面还是存在很严重的热损伤，只能看到融化的表面，无法观察到隔膜的孔道结构。而使用冷冻切割样品台后，我们就能够增大加速电压(加速电压5kV，加工温度-50°C)，不间断地加工样品，所得隔膜截面平整无污染 (图3(c)和(d))，孔道结构清晰可见，未观察到热损伤现象。
上述结果表明，锂电池隔膜样品对离子束切割过程中温度及其敏感，不合适的加工条件会造成热损伤，引起严重的表明结构形变。Leica EM TIC3X冷冻切割样品台能够精确地控制样品加工过程中的温度，避免热损伤的产生，得到最真实可靠的样品截面形貌结构。
 
相关产品：Leica EM TIC3X三离子束研磨仪

首先，仪器要考虑防腐防锈的问题。

      定氮仪是较恶劣环境下工作的仪器：浓硫酸，硼酸，氢氧化钠等腐蚀体和加热在仪器内产生负压。这对仪器的外观有很大的考验，为此沛欧公司提出了“永不生锈"的承诺，全部外壳大胆应用了价格较高ABS工程塑料，抛弃了传统的金属作为外壳，一举解决了外壳生锈的顽疾。这一举措得到了用户的好评，告别了定氮仪实验室的锈迹斑斑，改善了工作环境，也提高了仪器的美观度。更重要的是沛欧公司的防腐理念也引起了同行的重视，纷纷选用ABS作为防腐材料。
其次，注重仪器的内部质量

1. 定氮仪的工作条件决定了对零配件材料的苛求，为此沛欧关注合格的材料胜于关注低的价格，能保证仪器长久使用的材料，是我们选用的标准，为此沛欧多次为选用的材料而做了大量的试验，保证了材料关。例如：内部管道，电磁阀，冷凝管等。
* 为了碱路的防腐，沛欧特制了管道，解决管路老化的顽疾，保证管道不泄漏，保证了仪器的回收率，尤其保证低浓度样品回收率。数年不用更换管道
* 选用的电磁阀，使得每次加液一致性提高。并减少故障率。
* 冷凝管的效果直接影响蒸馏高浓度样品的回收率，沛欧定氮仪蒸馏加热功率达到1.5KW，能够产生足够的蒸汽包裹氨气，而的冷凝管能确保足够量的蒸汽能冷凝到足够低的温度，保证高浓度的样品不泄漏，保证了仪器的回收率。而低功率蒸馏器，保证不了高浓度样品的回收率

2. 在生产工艺上精益求精，制订了严格的检验标准，从细处着手，关注每一个细节。保证合格的仪器到用户实验室。

3. 在国内运输条件较差的情况下，改善包装质量，用高温处理的夹板木箱代替纸箱或实木箱，既保留了纸箱的柔性，也保留了实木的刚性，Z大可能的减少运输对仪器的伤害。
      通过产品合理设计，材料选择，严格的生产工艺和细致的产品检验，使每一款的沛欧产品都对得起用户的信任。上海沛欧分析仪器有限公司将保持自己的风格，感谢沛欧用户对我们的信任，更为潜在用户提供高品质，高性价比的仪器。

沛欧 SKD-1000全自动凯氏定氮仪

全自动凯氏定氮仪（蛋白质测定仪）是根据经典凯氏定氮原理设计的一套自动智能测检测仪器，广泛应于检测粮油食品、乳制品、饮料、饲料、土壤、化肥、沉淀物和化工产品中氨氮、蛋白质氮的总体含量，是产品质量检测的重要理化分析仪器。

沛欧 SKD-800自动凯氏定氮仪

SKD-800自动凯氏定氮仪是沛欧公司食品和肥料、饲料、食品、水、土壤、生化剂等行业的氮/蛋白质分析。

您给沛欧的是信任，沛欧还您的是价值！

上海沛欧专业、专心生产凯氏定氮仪、红外石英消化炉、卡尔费休水分仪、

二氧化硫检测仪、土壤阳离子交换量检测仪

欢迎来电：021-64086301

（来源：上海沛欧分析仪器有限公司）

实时荧光定量PCR技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。由于其JZ度好、灵敏度高，在分子生物学研究和医学研究等方面得到了广泛的应用，尤其是在基因表达差异分析方面。基因表达差异分析一般是比较不同时空样本或不同处理样本（药物处理，物理处理和化学处理等）之间特定基因的表达差异。

当检测出某个基因的表达是上调或下调时，我们并不知道这种表达差异是源自于它本身表达量的变化，还是样本量大小或者操作导致的RNA的损失等其他原因导致表达量的变化。为了减少实验偏差并产生准确的表达水平，RT-qPCR往往需要考虑几个变量（如操作误差或RNA提取量、得率及变异等）进行归一化处理。目前，RT-qPCR标准化最常用的方法是使用内参基因进行均一化处理。

什么是内参基因？

理想情况下，在所有发育阶段和不同实验处理的反应中，内参基因在不同组织的所有样本中应具有相对稳定的表达水平。内参基因通常是各种管家基因，例如ATCB、GAPDH、β-actin、18S rRNA等。它们的表达水平受环境因素影响较小，并且可以在生物体几乎全部组织及各个生长阶段持续表达。在不同的组织中，管家基因mRNA的含量都很丰富。

内参基因的作用

在基因表达差异分析中内参基因可以用于校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样定量的结果才更为可信。一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。

理想的内参基因应该满足以下条件：

1.不存在假基因(Pseudogene)，以避免基因DNA的扩增；

2.高度或中度表达，排除低表达；

3.稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞)，而且其表达量是近似的，无显著性差别；

4.表达水平与细胞周期及是否活化无关；

5.其稳定的表达水平与目标基因相似；

6.不受任何内源性或外源性因素的影响，如不受任何实验处理措施的影响。

内参基因的评估

然而，已有证据表明，一些用于控制实验偏差的传统内参基因仅在特定条件下是相对恒定的表达水平。很明显，内参基因是具有一定的特异性，没有通用的内参基因可用于所有实验的内控，这也表明在进行RT-qPCR实验之前，必须正确选择内参基因。那么在选择内参基因时，可以通过geNorm、BestKeeper、NormFinder、RefGenes 等工具来评估，这是保证结果可靠准确的前提。其次可对候选的内参基因进行qPCR 实验做进一步的筛选。在不同样本中均稳定表达的内参基因，即比较各样品中Cq平均值以及Cq值的标准偏差，选择SD最小的基因作为实验内参。

现在对内参基因的选择有所了解了吗？

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简介

衍射光栅用于将多色光分离成其组成的波长。在拉曼光谱仪中，衍射光栅用于将收集的拉曼散射的组成波长分离到CCD相机的不同像素上进行检测。所有拉曼光谱仪需要至少一个衍射光栅，并且经常配置多个衍射光栅以允许用户对其样品和激发波长进行最 佳的光栅选择。

图1. 爱丁堡仪器拉曼光谱仪RMS1000（左）和RM5（右）

当通过拉曼光谱分析样品时，可能需要多个激发源来覆盖用户样品的范围，例如，紫外、可见或近红外区域的激光。RM5拉曼光谱仪最 多可内置三个激光器，RMS1000拉曼光谱仪最 多可内置五个激光器，并可选择外置激光器。为了使用多个激光器，RM5和RMS1000的光谱仪可以容纳多达五个衍射光栅，从而使光栅最适合激光器的波长和用户的要求。用户可以从RM5和RMS1000上的Ramacle®软件（图2）的下拉菜单中选择光栅。选择后，光栅塔轮将自动移动到所选光栅，这意味着用户无需手动更换光栅。然后，Ramacle®将显示该光栅和激发激光器在波数和波长上可实现的光谱范围。在为拉曼光谱仪选择衍射光栅时，有四个主要考虑因素：光谱分辨率、光谱范围、闪耀波长和激发波长。

图2. Ramacle®软件的测试界面，标记处显示光栅的选择

光谱分辨率

增加刻线密度增加光谱分辨率

光栅具有固定的刻线密度（以每毫米刻线为单位，gr/mm），可控制光的色散。刻线密度越高，光谱分辨率越好，例如，1200 gr/mm光栅将提供比150 gr/mm光栅更高的光谱分辨率。图3显示了低和高刻线密度光栅对光的色散。较高刻线密度光栅将光传播到CCD的较大区域，增加了光谱分辨率。简单的经验法则是，当刻线数量加倍时，分辨率大致加倍。

图3. 低和高刻线密度光栅对光的色散

为了说明刻线密度对光谱分辨率的影响，使用五个衍射光栅和532nm激发波长测量了硅衬底上MoS2的光谱（图4）。MoS2的分析侧重于350-450 cm-1之间的两个峰。这些峰对于检测存在的MoS2的层数至关重要。使用300 gr/mm光栅，光谱分辨率不足以分辨两个单独的峰，仅可以看到单个宽特征。随着gr/mm的增加，我们看到两个单独峰的分辨率提高。这两个峰的分辨率越高，关于峰位置和层数的信息就越准确。这一测量说明了光谱分辨率的重要性。

图4. 使用5个不同光栅获取的MoS2的拉曼光谱

图4还显示了样品中硅峰的半峰宽（FWHM）值。Ramacle®可以提供FWHM值（峰值宽度为最 大强度的一半），并在光谱上显示这些值。从300 gr/mm光栅开始，我们观察到的FWHM为22.9 cm-1。当使用1800 gr/mm的光栅时，该值降至4.8 cm-1，这突出了随着刻线密度的增加，光谱分辨率的提高。

光谱范围

增加刻线密度减小光谱范围

改变光栅的刻线密度会影响所讨论的光谱分辨率，但也会影响光谱范围。将环己烷样品放置在比色皿支架中，使用所有五个光栅用638 nm激发进行分析（图5）。光谱再次显示了分辨率如何随着刻线密度的增加而增加，但现在也显示了高刻线密度的缺点，降低了光谱范围。光谱仪的光谱范围与光栅的刻线密度成反比。

图5. 使用不同光栅和1800gr/mm光栅（品红色）扩展扫描的环己烷的拉曼光谱。插图显示了具有300 gr/mm和1800 gr/mm光栅的样品的高波数区域。

上述光谱清楚地表明，随着刻线密度的增加，光谱范围减小。对于300 gr/mm，光谱范围达到约7400 cm-1，而1800 gr/mm光栅仅达到约1100 cm-1。因此，获取的拉曼光谱的光谱范围与分辨率之间存在固有的取舍。

为了两全其美，RM5和RMS1000的Ramacle®软件具有一个称为扩展扫描的功能。在扩展扫描中，Ramacle®软件在衍射光栅的不同中心波长位置采集一系列光谱，然后将这些光谱自动拼接在一起，以在宽光谱范围内提供单个拉曼光谱。该功能使用户能够同时使用高gr/mm光栅实现高光谱分辨率和宽光谱范围。图5显示了拼接1800 gr/mm光谱（品红色）的示例，其范围高达~5000 cm-1。

扩展扫描的缺点是采集时间的增加。由于光栅需要移动并采集多个光谱，采集时间将增加，对于上述示例（0-5000 cm-1），扩展扫描是将九个单个光谱拼接在一起。因此，如果曝光时间为1s，则最 终光谱将需要9s才能获取。如图5中的插图所示，1800 gr/mm光栅的光谱分辨率提高，可以更好地分辨高波数区域的峰值，而分辨率较低的300 gr/mm光栅可以更快地进行测量。

闪耀波长

闪耀波长表示光栅优化的激发波长

衍射光栅的效率总是与波长有关。最 大衍射效率的波长称为闪耀波长。衍射光栅可以用不同的闪耀波长制造，以优化不同的波长区域。通常，可见光和近红外激光器可以使用具有相同闪耀波长的光栅，同时保持相似的效率；然而，当在“标准”拉曼激光器的极端使用激光器时，例如，≤325nm和≥1064nm激发，需要不同闪耀波长的光栅来优化光谱仪。例如，当光栅被称为“Blaze 300 nm”时，它将针对UV进行优化，而“Blaze 750 nm”将针对NIR进行优化。

图6显示了两个600 gr/mm光栅的绝 对效率曲线。一个具有550 nm的闪耀波长，非常适合可见光激光器，另一个750 nm，适合NIR激光器。曲线揭示了为什么闪耀波长很重要。如果用常用的785nm激光器激发，550nm闪耀光栅将仅具有约52%的效率。然而，NIR优化的光栅将具有约71%的高得多的效率。这将对所需的频谱质量和采集时间产生重大影响。

图6. 突出显示了两个激光器（532nm和785nm）下，闪耀波长分别为550nm和750nm的两个600gr/mm光栅的绝 对效率曲线。

光致发光测量

低刻线密度光栅可用于UV和可见激光器以获取PL光谱

拉曼光谱仪也可用于测量光致发光（PL），通常使用UV或可见光激发。PL光谱通常非常宽，应选择低刻线密度光栅以获得尽可能宽的光谱范围。在图7所示的示例中，使用532 nm激光分析笔墨。通过使用300 gr/mm光栅，光谱范围可以覆盖1200 nm，这意味着用户可以很容易地看到700 nm处的PL峰。

由于PL非常强，当使用300gr/mm光栅时，任何拉曼峰都会丢失到PL峰的强度中。然而，通过改变为1800gr/mm光栅，仍然可以观察到拉曼光谱。在这样做时，来自墨水的拉曼峰可以在没有PL干扰的情况下被分辨，因为它发生在PL峰或检测器饱和之前。以这种方式使用光栅的组合允许从样品中获得PL和拉曼光谱。

图7. 使用300gr/mm（绿色）和1800gr/mm（红色）光栅获取的笔墨的PL和拉曼光谱

激发波长

UV和可见激光器适用于高刻线密度的光栅

NIR激光器适用于低刻线密度的光栅

可以认为光栅的色散功率在波长方面是恒定的；然而，拉曼光谱使用能量相关单位，波数（cm-1），表示入射光子的能量偏移。这意味着色散拉曼光谱仪的光谱分辨率随着激光激发波长的降低（即从红色到绿色再到蓝色）而降低。因此，当使用785nm激光器时，实现与532nm激光器相同分辨率所需的光栅将需要更少的gr/mm。

此外，由于色散与波长有关，因此光栅可以在一个工作范围内成功运行。刻线密度为n的光栅的理论波长极限为λ=2/n。例如，2400 gr/mm光栅将被限制在光谱的绿色端，即可见光和紫外激光器，而3600 gr/mmm光栅在500nm后不会衍射太多，使其适合于UV激发，而不适合于NIR激发。

图8显示了五个常用光栅的532 nm（绿色）和785 nm激光器（红色）的光谱范围。与可见光选项相比，近红外激光器的光谱范围明显减小。该图还显示了从50 cm-1开始的单次扫描和扩展扫描选项的范围。

图8. 使用532nm和785nm激发的5个光栅的光谱范围

拉曼光谱中使用的三种激光可以大致分为三个区域：紫外、可见光和近红外。对于UV激光器，建议使用高刻线密度光栅，例如2400 gr/mm和3600 gr/mmm，这主要是由于在较低波长下激发时光谱分辨率的固有降低。此外，UV激光器通常用于研究例如半导体样品中因应力和应变引起的小峰值变化，因此需要高光谱分辨率。

当需要中高光谱分辨率时，可见激光通常与1200 gr/mm和1800 gr/mm光栅一起使用。然而，一些样品，如过渡金属二氢化物和石墨烯，可能会使用更高的刻线密度光栅来检测细微的光谱变化。对于UV和可见光激光器，如果用户对PL感兴趣，可以使用较低的刻线密度光栅来获取整个光谱，例如300 gr/mm和600 gr/mm。

对于NIR激光器，推荐的光栅将具有较低的刻线密度，例如300 gr/mm和600 gr/mm。首先，这是光谱范围，如图8所示，具有近红外激光器的高刻线密度光栅所提供的范围非常有限。此外，如上所述，NIR激光器将固有地提供比UV或可见激光更好的光谱分辨率。这意味着使用具有低刻线密度光栅的近红外激光器仍将提供高光谱分辨率。

关于近红外激光器的最后一点需要考虑的是拉曼强度和信噪比（SNR）。随着刻线密度的增加，仪器的拉曼通量将降低。这种效应发生在所有激发波长上；然而，这种效应对于NIR激光器尤其显著。拉曼散射强度与λ-4成正比，其中λ表示激光波长。因此，随着激光波长增加到近红外，拉曼强度将下降。光栅效应和波长效应的复合意味着在NIR中使用高刻线密度光栅对信噪比（SNR）特别有害，并且光谱将需要长的曝光时间。图9中的光谱来自使用785 nm激光和两个相同闪耀波长的光栅的药片。两个光栅之间的SNR差异在图9的红色框中突出显示（归一化后）。在这种情况下，300 gr/mm显然提供了更高的SNR。

图9 上：具有相同曝光时间和两个不同光栅的药片的拉曼光谱。下：归一化光谱放大部分，显示了使用900 gr/mm光栅噪声增加。

表1显示了拉曼光谱中最常用的两种激发波长532nm和785nm的光栅选择的简化摘要。请注意，这些光谱范围用于扩展扫描，最 终光栅选择也将受到前面讨论的因素的影响。

表1 532 nm和785 nm激发的光栅选择

结论

在拉曼光谱中选择光栅需要用户选择优先顺序。确保光栅在激发激光的正确波长下闪耀，这将获得尽可能高的效率。为测试选择必要的刻线密度，这将取决于所需的光谱分辨率和光谱范围。在选择光栅时，还需要考虑其他因素，如拉曼强度、采集时间和信噪比。爱丁堡仪器拉曼光谱仪可以容纳多达五个光栅，用户可以很容易地在其系统中填充一系列刻线密度和闪耀波长的光栅，以满足其应用需求，在分析样品时提供尽可能高的灵活性。