同位素碘标记蛋白原理

诊断试剂中化学发光底物吖啶酯的标记原理化学发光免疫检测中，我们用吖啶酯先标记上抗体蛋白，才能在免疫反应后对待测物进行检测，因此如何标记抗体就非常的关键了。吖啶盐和相关化合物已被广泛证明为非常有用的化学发光标记物，其稳定性、标记特异性和检测灵敏度都超越放射性同位素。

吖啶酯-NHS即吖啶琥珀酰亚胺酯(本试剂盒所提供)能与蛋白质的一级氨基发生反应。在碱性条件下，NHS作为离去基团被取代，蛋白质与吖啶酯形成稳定的酰胺键。反应完成后，多余的吖啶盐通过脱盐柱除去。在碱性过氧化氢存在下，吖啶标记的蛋白不需要酶催化就可自行发光。

因此激发液的加入导致反应体系立即释放约430nm的光子，通过使用标准光度计luminometer计数光子数量就可检测蛋白质的浓度。因为此发光过程是十分短暂(整个过程在2秒钟内完成)，样品必须直接放在光度计内部光子探测器前面。蛋白质、多肽、抗体、核酸都可以用吖啶酯标记。

化学发光试剂这里需要注意的是，溶解吖啶琥珀酰亚胺酯时，使用的DMF必须严格无水，防止吖啶酯水解不使用时，干燥密封-20°℃保存。针对传统吖啶酯，在其结构上进行了修饰，增大了位阻，增强了抗水解性。

如在室温下，在pH为7.0的PB缓冲液中很稳定。如果是不含-NHS的吖啶羧酸需要加入缩合剂EDCI等，才能与含胺基的蛋白发生偶联反应。吖啶酰肼，含有游离氨基，吖啶酰肼末端适用直接偶联含有醛基的多糖核酸或者蛋白质等。

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