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前言

在PCR检测过程中，不可否认的是，没有任何检测是100%准确的，比如我们可能也曾听过假阳性这个名词，那为什么会出现假阳性呢?这其实跟实验操作过程造成的污染相关，在实验开展过程中，主要有4种污染途径：标本间交叉污染、PCR试剂污染、PCR扩增产物污染、实验室克隆质粒污染。

如何对污染进行监测？

1. 阳性对照

在建立PCR实验室及一般的检验单位都应设有PCR阳性对照，它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否符合理论要求的一个重要的参考标志，阳性对照要选择扩增度中等、复性好，经各种鉴定是该产物的标本，如以重组质粒为阳性对照，其含量宜低不宜高(100个拷贝以下)，但阳性对照尤其是重组质粒及高浓度阳性标本，其对检测或扩增样品污染的可能性很大，因而当某一PCR试剂经自己使用稳定，检验人员心中有数时，在以后的实验中可免设阳性对照。

2. 阴性对照

每次PCR试验务必做阴性对照，它包括：①标本对照，被检标本是血清就用鉴定后的正常血清做对照，被检的标本是组织细胞就用相应的组织细胞做对照；②试剂对照，在PCR试剂中不加模板DNA或RNA，进行PCR扩增，以检测试剂是否污染。

3. 重复性实验

4. 选择不同区域的引物进行PCR扩增

如何避免PCR污染？

实验室防污染是重中之重，毕竟影响最终检测结果，那么我们有哪些防污染的方法呢？

除了注意避免人工操作引入的污染，我们在实验时应设立适当的阳性对照和阴性对照，阳性对照以能出现扩增带的标准病原体核酸为宜，并注意交叉污染的可能性，每次反应都应由一管不加模板的试剂对照及相应不含有被扩增核酸的样品作阴性对照。同时减少PCR循环次数，PCR产物达到检测水平就适可而止。

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